三帶喙庫蚊對重要殺蟲劑靶標抗性及其對乙腦病毒易感性研究.pdf

1、三帶喙庫蚊(Culextritaeniorhynchus)是我國流行性乙型腦炎(JapaneseBencephalitis,乙腦)的主要傳播媒介。其孳生地多為稻田,廣泛接觸農(nóng)業(yè)用殺蟲劑,由于殺蟲劑的連續(xù)大量使用加之蚊蟲世代歷期短、繁殖力強等因素,導致了三帶喙庫蚊抗藥性的發(fā)生和發(fā)展。目前我國不同地區(qū)三帶喙庫蚊已經(jīng)對多種殺蟲劑產(chǎn)生了不同程度的抗性,因此迫切需要對殺蟲劑抗性的發(fā)生和發(fā)展進行深入研究。蚊蟲產(chǎn)生抗藥性的同時,往往伴隨著某些生理生化

2、功能的改變,而蚊蟲生理生化功能的改變會影響蟲媒病毒在其體內的增殖發(fā)育,最終影響蚊蟲對疾病的傳播。本研究以野外采集的三帶喙庫蚊種群為研究對象,測定其生物抗性,并對其靶標基因(鈉離子通道基因和乙酰膽堿酯酶基因)進行研究,分析基因頻率與生物抗性之間的相關性,了解三帶喙庫蚊種群Kdr和AChE抗性基因頻率的現(xiàn)狀并推測抗性發(fā)展趨勢。另外還對不同種群三帶喙庫蚊進行經(jīng)口感染乙腦病毒,并測定各感染種群對溴氰菊酯和高效氯氰菊酯的抗性水平,分析抗性水平與感

3、染率之間的相關性,初步探索抗性對于媒介蚊蟲易感性的影響。
　　本研究結果如下:
　　1.三帶喙庫蚊自然種群抗性水平檢測結果
　　幼蟲抗性檢測結果顯示:各自然種群三帶喙庫蚊幼蟲對常用的5種殺蟲劑產(chǎn)生了不同程度的抗性。對溴氰菊酯、高效氯氰菊酯、氯菊酯、敵敵畏和殘殺威的抗藥性指數(shù)分別為:(1.70-103.93)、(7.83-65.81)、(3.54-75.70)、(291.85-530.89)和(51.32至108.83)

4、倍。成蟲抗性檢測結果顯示:6個自然種群成蚊對溴氰菊酯(0.025％)的KT50值為36.99至89.96min,1小時擊倒率為16.67%至66.33%,24小時死亡率為5.17%至75.25%;4個三帶喙庫蚊種群對氯菊酯(0.5%)的KT50值為6.63至160.37min,3小時擊倒率為51.92%至100.00%,24小時死亡率為15.38%至91.30%。
　　2.三帶喙庫蚊擊倒抗性的研究
　　通過克隆測序獲得敏感和

5、抗性三帶喙庫蚊鈉通道ⅡS4-ⅡS6區(qū)段部分cDNA序列,該序列長度為360bp,包含L1014(Kdr)突變位點,編碼120個氨基酸殘基。敏感序列Genbank登錄號為:KC878694。與敏感個體相比,抗性個體鈉通道ⅡS4-ⅡS6區(qū)段cDNA序列1014位點堿基“A”突變?yōu)椤癟”,導致相應位置亮氨酸(L)突變?yōu)楸奖彼?F)。不同地理種群的三帶喙庫蚊鈉通道內含子長度和堿基組成具有多態(tài)性。
　　3.三帶喙庫蚊kdr基因頻率與抗性水

6、平的相關性分析
　　各個自然種群kdr基因頻率在10.00%至39.55%?？剐约兒献?RR)在部分種群未檢測出,其余種群抗性純合子(RR)個體在檢測樣本中所占比例為(2.86-10.00%);敏感純合子(SS)為(50.00-80.00%);雜合子(RS)為(17.65-50.00%)。三帶喙庫蚊種群幼蟲對3種擬除蟲菊酯類殺蟲劑的致死中濃度(LC50)與Kdr基因頻率有一定的相關性。對溴氰菊酯、高效氯氰菊酯和氯菊酯半數(shù)致死濃度(

7、LC50)與kdr基因頻率之間的相關系數(shù)分別為0.7150、0.6874和0.4280,P值都小于0.05。提示kdr等位基因突變(L1014F)可以作為三帶喙庫蚊對擬除蟲菊酯類殺蟲劑抗性的分子標記。
　　4.三帶喙庫蚊乙酰膽堿酯酶(AChE)基因與抗性水平的相關性分析
　　RT-PCR法獲得AChE基因部分cDNA序列,長709bp?？剐云废礎ChE基因片段第250-251號堿基“TT”突變?yōu)椤癎G”,突變導致相應位置氨基

8、酸由苯丙氨酸(F)突變?yōu)樯彼?W)發(fā)生變化,即F455W突變。AChE基因頻率的檢測結果顯示:所有檢測樣本AChE基因型都為抗性純合子(RR),AChE基因頻率都為100%。提示該等位基因突變(F455W)已經(jīng)不可以作為三帶喙庫蚊對有機磷和氨基甲酸酯類殺蟲劑抗性的分子標記。
　　5.三帶喙庫蚊對乙腦病毒易感性與其抗性水平的相關性分析
　　三帶喙庫蚊實驗室品系、南京江浦種群F1、濉溪南坪種群F1代、安康建民種群F1代和F3代