外源性NGF對大鼠腦出血的有效性研究.pdf

1、第一部分，Ⅶ型膠原酶誘導大鼠腦出血模型的制備
　　目的:探討利用Ⅶ型膠原酶制作大鼠腦出血模型,使之成為一種穩(wěn)定有效,可重復的腦出血模型方法。
　　方法:雄性SD大鼠48只隨機分為實驗組和對照組,將等體積Ⅶ型膠原酶和無菌生理鹽水分別注入實驗組和對照組大鼠尾殼核。通過觀察兩組大鼠在第1、3和7天不同時間點的神經功能缺損變化,最后處死后腦部尾殼核形成的血腫體積大小以及腦組織化學改變。
　　結果:實驗組大鼠都有神經功能缺損明顯

2、,尾殼核有明顯出血灶,而對照組神經體征不明顯,尾殼核未見明顯出血,兩組相比較具有明顯統計學意義(p<0.05)。同樣,切片HE染色中可見穿刺道大量紅細胞存在,血腫周圍細胞水腫明顯。而對照組僅見穿刺針道有少許血細胞存在。
　　結論:Ⅶ型膠原酶制作大鼠腦出血模型是一種成功的穩(wěn)定的可重復的方法。
　　第二部分，外源性NGF對大鼠腦出血的有效性研究
　　方法:將SD大鼠隨機分成三組,即假手術組、對照組和NGF組。對照組和NGF

3、組均按第一部分造模方法所述以Ⅶ型膠原酶制備腦出血模型,假手術組只將給予頭皮切開,不做任何處理便縫合皮膚。NGF組是經孔給予2μl混有300uNGF的生理鹽水緩慢注入,對照組則給予2μl無菌生理鹽水,假手術組不給予NGF或無菌生理鹽水。術畢觀察三組大鼠神經功能缺損變化,按第1、3和7天三個時間點處死大鼠,處死前給予BrdU抗體按50mg/kg行腹腔注射,4％多聚甲醛前固定鼠腦,取出腦組織后再以4%多聚甲醛后固定,20%和30%蔗糖液脫水,

4、錫紙包裹后凍存于-80℃冰箱中。再做10μm厚的冰凍切片,將冰凍切片行免疫組化檢測,在光學顯微鏡下計數新生神經元細胞(Nestin抗體標記)數目、新生血管數目(VEGF抗體標記)以及含BrdU的增殖神經元的數目,最后將各組數據性統計學分析。
　　結果:假手術組神經功能缺損評分前后均為0分;對照組造模后有明顯神經功能缺損,但后期神經功能恢復緩慢;NGF組在給予NGF后神經功能缺損評分有改善,第7天時間點改善最明顯,統計學分析有意義(