隨機引物PCR定量檢測血漿中循環(huán)DNA及其在腫瘤臨床的應用.pdf

1、背景:外周血腫瘤標記由于檢測的方便和非侵入性已逐步替代了受到標本采集以及無法連續(xù)檢測和隨訪追蹤等諸多限制的組織學腫瘤標記。而外周血循環(huán)DNA及其改變的分子生物學檢測正以其不可替代的優(yōu)點逐漸被人們所重視,并成為腫瘤細胞生物學及分子生物學研究中引人注目的一個亮點。血漿循環(huán)DNA的研究分為定性和定量兩種:前者主要檢測血漿中腫瘤特異性基因改變,定量檢測則以血循環(huán)DNA總量為指標,兩者均可反映腫瘤的存在和嚴重程度。早期檢測DNA含量的方法有二苯胺

2、法、溴化乙錠法、對流免疫電泳法及RNA-DNA雜交法等,但這些方法費時且缺乏敏感性及特異性,這就需要我們進一步改進研究方法,使血漿循環(huán)DNA檢測更能反映血漿中的確切含量。同時,其在腫瘤的臨床應用價值也需進一步深入研究。
　　 目的:建立隨機引物實時熒光定量PCR定量檢測血漿循環(huán)DNA的方法,并應用于肺癌和肝癌患者的臨床研究,探討其在肺癌和肝癌診斷及監(jiān)測化療療效中的臨床應用價值。
　　 材料和方法:建立隨機引物實時熒光定量

3、PCR檢測血漿循環(huán)DNA的方法并繪制標準曲線；收集95例肺癌患者化療前后、40例肺良性疾病患者、60例肝癌患者介入前后、20例代償期肝硬化患者、20例活動性乙型肝炎患者和60例健康志愿者的血漿樣本,抽提血漿循環(huán)DNA,應用隨機引物實時熒光定量PCR對以上血漿樣本進行定量。另外,肝癌標本AFP檢測應用羅氏公司E170電化學發(fā)光免疫分析模塊檢測。所得結果應用SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果：肺癌組、肺良性疾病組及健康

4、對照組血漿循環(huán)DNA水平分別為(42.5±21.3)ng/ml、(18.5±12.2)ng/ml和(11.5±10.7)ng/ml,肺癌組血漿循環(huán)DNA明顯高于肺良性疾病組及健康對照組,差異有顯著性(P<0.001),而對照組和良性疾病組之間差異無顯著性；肝癌組、肝硬化組和肝炎組血漿循環(huán)DNA濃度分別為(50.1±38.6)ng/ml、(30.5±14.6)ng/ml和(64.3±61.4)ng/ml,均明顯高于健康對照組(11.5±1

5、0.7)ng/ml,在統(tǒng)計學上有顯著性差異(P<0.001),而肝癌組與肝硬化組及肝炎組之間的血漿循環(huán)DNA水平無明顯差異(P>0.05)；血漿循環(huán)DNA水平與肺癌和肝癌患者腫瘤大小、TNM分期均密切相關(P<0.05),而與肺癌的病理類型,與肝癌的腫瘤數(shù)目、有無腫瘤包膜、血清AFP濃度無明顯相關性(P>0.05)；血漿循環(huán)DNA水平在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-Ⅳ期肺癌患者化療前后及Ⅰ-Ⅱ期、Ⅲ-Ⅳ期肝癌患者介入前后均有顯著差異(P<0.05)。