三羥異黃酮抑制人肝癌細胞SMMC-7721侵襲轉移的實驗研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，其死亡率在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中列第三位，僅次于胃癌和食管癌。我國每年約有11萬人死于肝癌，占全球肝癌死亡人數的45％。值得注意的是世界各地原發(fā)性肝癌發(fā)病率有上升趨勢，嚴重威脅著人類的健康。手術切除仍是目前根治原發(fā)性肝癌的最佳方法，但大多數患者在明確診斷時已失去手術機會，其原因主要是癌細胞已發(fā)生了肝內或遠處轉移，導致手術切除或肝移植術后表現出較高的復發(fā)轉移率。因此，尋求有效的藥物進行綜合治療，以改善原發(fā)性

2、肝癌的預后，降低其轉移和復發(fā)，提高患者的生活質量十分必要。目前主要的化療藥物多具有細胞毒性，副作用大，人體耐受性差。而提純于天然動植物的低毒、高效的抗癌活性物質的開發(fā)和利用已成為近年來國內外原發(fā)性肝癌治療研究的熱點。 三羥異黃酮是一種純化于豆制品的植物雌激素，是大豆異黃酮的主要成分之一，具有廣泛的生物學作用。眾所周知，大豆異黃酮的抗癌作用已得到國內外的公認。近年來的大量動物實驗、體外研究以及流行病學調查均表明，作為大豆異黃酮中最

3、為重要的一種活性物質，三羥異黃酮可作為一種潛在的腫瘤化學預防劑。它在體外能抑制多種腫瘤細胞的生長，使細胞生長周期停滯于G2/M期，并且可以誘導腫瘤細胞分化，促進腫瘤細胞凋亡；在動物在體實驗中能抑制腫瘤細胞增殖和新生血管形成，對腫瘤的生長和轉移均顯示了良好的治療作用。作為一個很有潛力的抗腫瘤藥物，三羥異黃酮抗肝癌的作用也受到關注，其可能機制包括：①抑制蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性；②弱雌激素作用；③抗氧化作用；④抑制拓撲酶Ⅱ的活性；⑤誘導

4、細胞凋亡；⑥抑制細胞增殖；⑦抑制新生血管生成等。 近年來三羥異黃酮抗腫瘤侵襲轉移的作用頗受國內外學者關注。侵襲和轉移是惡性腫瘤重要的生物學特征，尤其轉移在臨床上為絕大多數腫瘤的致死因素。因此腫瘤轉移對癌癥治療是一種嚴重的挑戰(zhàn)。侵襲和轉移是惡性腫瘤生長發(fā)展中密不可分的相關過程。侵襲是指癌細胞侵犯和破壞周圍正常組織，進入循環(huán)系統(tǒng)的過程。轉移是指侵襲中癌細胞遷移到特定組織器官并發(fā)展成為繼發(fā)性癌灶的過程。侵襲與轉移是同一過程中的兩個不同

5、階段，侵襲是轉移的前奏，轉移是侵襲的結果。腫瘤的形成和發(fā)展除與細胞自身基因突變所導致的原癌基因激活和(或)抑癌基因失活有關外，還受腫瘤細胞所處微環(huán)境變化的影響。細胞外基質(ECM)不僅是細胞賴以生存的場所，而且是細胞與細胞之間自分泌和旁分泌調節(jié)的必經之路與緩沖地帶。ECM成分作為維持細胞微環(huán)境穩(wěn)態(tài)的物質基礎，決定著細胞外刺激信號的性質、強度與時空性。近年研究發(fā)現，ECM結構與組成成分的變化是其影響細胞功能的重要方式，其變化很大程度上受基

6、質金屬蛋白酶(MMPs)的調節(jié)。MMPs是一類鋅離子依賴的內肽酶，能降解細胞外基質成分的重要蛋白水解酶，在幾乎所有腫瘤組織中均存在MMPs高表達及高活性的現象。在腫瘤移植試驗中，相對良性的移植瘤細胞可因MMPs的高表達而獲得惡性的性質。相反，高度惡性的移植瘤細胞也可因MMPs表達或催化活性降低而減弱其侵襲力。MMPs在腫瘤侵襲轉移中的作用可概括如下：①破壞局部組織結構，促進腫瘤生長；②破壞基底膜屏障，利于腫瘤侵襲轉移；③通過對細胞外基質

7、的改變，促進腫瘤新生血管的形成。目前多數研究也表明，MMPs與肝癌的侵襲轉移密切相關。MMPs在肝臟腫瘤細胞中的表達以彌漫型或顆粒型局限于胞漿。目前在肝臟中研究較多的是MMP-2和MMP-9，它們己成為公認的肝癌侵襲轉移相關蛋白。根據作用底物不同，MMP-2和MMP-9屬于Ⅳ型膠原酶類，它們的分子量分別為72kD和92kD，主要降解基底膜的重要成分Ⅳ型膠原，另外還能降解明膠和纖粘蛋白。此外在MMPs家族中MMP-2和MMP-9還具有直接

8、促血管生成的作用。MMP-2缺陷小鼠的腫瘤血管生成和生長速度均減慢，MMP-9可通過提高VEGF的生物可利用度而促進腫瘤血管生成。 目的：探討三羥異黃酮對人肝癌細胞SMMC-7721侵襲轉移的抑制作用及其可能的作用機制。 方法：應用體外細胞培養(yǎng)技術培養(yǎng)人肝癌細胞SMMC-7721；Boydenchamber體外侵襲模型檢測細胞的體外侵襲能力；免疫細胞化學檢測三羥異黃酮作用后肝癌侵襲轉移相關蛋白MMP-2、MMP-9的表達