血液系統(tǒng)疾病中LRP15基因甲基化狀態(tài)的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、為了準確了解DNA甲基化與細胞惡性轉化的關系,有必要詳細了解腫瘤DNA中特定序列的甲基化改變.LRP15基因是該室獲得的一段急性白血病復發(fā)病人中NotI酶切位點甲基化的27kbp DNA序列.生物信息學分析表明,它是一個與人類急性白血病及其他腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關的基因.為進一步從實驗上證實該基因修飾水平的變化是否與白血病的發(fā)生發(fā)展相關,我們選擇NPBSC、原代白血病細胞及正常細胞系、白血病細胞系作為研究對象,采用MS-PCR方法分別檢

2、測了LRP15基因的甲基化狀況,結果顯示COS7、K562、HL60細胞系及良性血液病、白血病、MDS標本中均未檢測到LRP15基因的缺失;LRP15基因修飾水平的變化與惡性腫瘤有關,而與正常細胞的成熟幼稚與否無關;LRP15基因在AL中甲基化陽性率明顯高于NPBSC,差異有統(tǒng)計學意義(p=0.000<0.05),表明LRP15基因甲基化與急性白血病有關;急性白血病的LRP15基因甲基化陽性率明顯高于慢性白血病,x<'2>檢驗二者差異有

3、統(tǒng)計學意義,其中8例CML患者LRP15基因均無陽性,而1例CML急變期患者LRP15基因甲基化呈陽性,提示LRP15基因甲基化可能對CML病情的發(fā)展和急性白血病的發(fā)生有意義;AL不同分型中LRP15基因甲基化陽性率無明顯差異.除了LRP15基因在惡性腫瘤中的甲基化狀況,我們還研究了其在非惡性血液病患者骨髓中的甲基化狀況,MS-PCR結果表明LRP15基因在非惡性血液病患者骨髓中的甲基化陽性率為55.56%(5/9),與健康供者相比差異

4、有統(tǒng)計學意義,表明LRP15基因甲基化不但與惡性腫瘤有關,與血液系統(tǒng)良性疾病也有一定關系.其中甲基化陽性的患者中4例與免疫系統(tǒng)疾病有關,初步提示LRP15基因甲基化可能對免疫系統(tǒng)疾病也有一定意義.為了進一步驗證MS-PCR檢測LRP15基因甲基化的準確性,排除污染的可能性,我們采用COBRA特異性引物,PCR擴增1例MS-PCR檢測為甲基化、非甲基化雙陽性的良性血液病(ITP)樣本,得到257bp大小的目的片斷,BstuI酶切鑒定,測序

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