苯甲酸雌二醇對(duì)體外培養(yǎng)的毛囊生長(zhǎng)和對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞膠原合成的影響.pdf

1、研究背景：雌激素是主要由卵巢分泌的類(lèi)固醇激素，它的主要作用是促進(jìn)女性生殖器官的發(fā)育和第二性征的出現(xiàn)并維持其正常狀態(tài)，同時(shí)它也影響全身主要器官系統(tǒng)的功能。皮膚是雌激素發(fā)揮作用的最大非生殖器官。雌激素對(duì)各種不同靶器官的生物學(xué)活性是由配體的結(jié)構(gòu)、雌激素受體(ER)亞型等狀況來(lái)決定。雌二醇是機(jī)體中主要發(fā)揮作用的雌激素，而苯甲酸雌二醇是臨床上進(jìn)行激素替代治療(HRT)的主要藥物之一。 雌激素在皮膚中發(fā)揮重要的作用，主要表現(xiàn)在：(1)阻止皮

2、膚老化。絕經(jīng)后女性皮膚發(fā)生深刻的變化：皮膚松弛和彈性下降、出現(xiàn)細(xì)小皺紋，同時(shí)皮膚干燥脫屑、修復(fù)功能減退、毛發(fā)數(shù)量減少等，組織學(xué)表現(xiàn)為：甘油聚糖濃度、水容量、膠原容量下降，這些變化可以通過(guò)局部和系統(tǒng)應(yīng)用雌激素得到逆轉(zhuǎn)。(2)對(duì)皮膚損傷的修復(fù)作用。有人研究認(rèn)為慢性損傷不易成功修復(fù)的原因是白細(xì)胞過(guò)度增多，膠原沉積下降。研究認(rèn)為：局部應(yīng)用雌激素可明顯逆轉(zhuǎn)老年病人損傷修復(fù)變慢的狀況。雌激素是一種損傷修復(fù)調(diào)節(jié)因子，在人類(lèi)和動(dòng)物模型中能逆轉(zhuǎn)年齡相關(guān)的

3、損傷愈合。(3)調(diào)節(jié)毛發(fā)生長(zhǎng)：對(duì)女性AGA病人局部應(yīng)用雌二醇苯甲酸酯、雌二醇戊酸酯、17α/β-雌二醇取得明顯的效果，它使毛發(fā)生長(zhǎng)期延長(zhǎng)、休止期縮短。(4)抑制皮脂腺分泌。 雌激素主要通過(guò)和雌激素受體(ER)相互作用調(diào)節(jié)信號(hào)傳導(dǎo)途徑發(fā)揮對(duì)靶器官的生物學(xué)作用。對(duì)人皮膚中ER分布的研究表明：ER在人皮膚中有廣泛的分布包括上皮組織的基底層及棘層的角質(zhì)形成細(xì)胞、毛囊外根鞘的細(xì)胞核、上皮基質(zhì)、毛乳頭、內(nèi)毛根鞘細(xì)胞、皮脂腺及汗腺、真皮的纖維

4、母細(xì)胞核。毛囊和成纖維細(xì)胞是雌激素在皮膚中作用的主要靶點(diǎn)之一。 毛囊是一種有周期特性的皮膚附屬器官，經(jīng)歷生長(zhǎng)期、退行期和休止期。毛囊不同周期階段的轉(zhuǎn)換和循環(huán)再生是由毛囊角質(zhì)形成細(xì)胞和毛乳頭成纖維細(xì)胞的雙向信號(hào)傳導(dǎo)來(lái)控制，許多生長(zhǎng)刺激因子和抑制因子參與了毛囊發(fā)育的調(diào)節(jié)及周期性活動(dòng)的控制。許多研究表明：雌激素對(duì)毛囊周期調(diào)節(jié)發(fā)揮重要影響。早在70年前，人們就發(fā)現(xiàn)毛發(fā)生長(zhǎng)和性激素有密切關(guān)系：去掉卵巢的豚鼠剪毛后毛發(fā)再生速度明顯快于生育期

5、的母鼠。而局部應(yīng)用雌二醇也表明大鼠、小鼠、和狗的毛發(fā)生長(zhǎng)受到抑制。在臨床上也觀察到婦女懷孕期間毛發(fā)脫落速度變慢，而產(chǎn)后毛發(fā)大量脫落。 成纖維細(xì)胞是真皮中的主要細(xì)胞成分之一。它形成真皮中的膠原纖維、彈性纖維、基質(zhì)等。真皮中膠原水平的下降是導(dǎo)致絕經(jīng)后婦女皮膚老化外觀的主要原因之一。研究表明：應(yīng)用雌二醇對(duì)鼠真皮成纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)膠原合成增加約76﹪。對(duì)鼠模型的研究發(fā)現(xiàn)：在光損傷皮膚和正常皮膚組織中，局部雌激素是重要的結(jié)締組織調(diào)節(jié)

6、因子，他能刺激新的結(jié)締組織帶的形成[12]。有人研究了年齡的老化和絕經(jīng)兩種因素對(duì)皮膚膠原的影響，結(jié)果表明，相對(duì)于年齡的老化，絕經(jīng)對(duì)膠原的影響更為顯著，表明了激素對(duì)膠原合成和表達(dá)有非常重要的意義。 本課題的研究主要包括以下兩個(gè)方面：(一)苯甲酸雌二醇對(duì)體外培養(yǎng)的毛囊生長(zhǎng)的影響目的：通過(guò)對(duì)豬毛囊和人毛囊進(jìn)行體外培養(yǎng)，來(lái)觀察苯甲酸雌二醇對(duì)毛囊生長(zhǎng)的影響。方法：本實(shí)驗(yàn)分別采用人毛囊和豬毛囊進(jìn)行體外培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分五組：空白對(duì)照組、和4個(gè)苯甲

7、酸雌二醇濃度組(10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L、10μmol/L)。每組12個(gè)毛囊。0、2、4、6、8天通過(guò)顯微鏡測(cè)量毛囊生長(zhǎng)長(zhǎng)度、觀察其形態(tài)變化。結(jié)果：與陰性對(duì)照組比較，苯甲酸雌二醇濃度為1μmol/L(人)/10μmol/L(豬)毛囊生長(zhǎng)受到抑制，培養(yǎng)8天后，毛乳頭結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)退行性改變。結(jié)論：苯甲酸雌二醇對(duì)毛囊生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。 (二)苯甲酸雌二醇及UVA輻照對(duì)體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖和膠原合

8、成的影響。 目的：研究苯甲酸雌二醇對(duì)體外培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞增殖、膠原合成及其對(duì)UVA抑制膠原合成的影響。方法：此實(shí)驗(yàn)由兩部分組成。實(shí)驗(yàn)一：用MTT法檢測(cè)苯甲酸雌二醇對(duì)體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞增殖情況，并應(yīng)用不同劑量苯甲酸雌二醇(2nmol/L,4nmol/L，8nmol/L，16nmol/L)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并于培養(yǎng)結(jié)束時(shí)收集細(xì)胞提取細(xì)胞mRNA測(cè)Ⅰ型和Ⅲ型前膠原的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)二：應(yīng)用UVA(10J/cm2)和苯甲酸雌二醇對(duì)細(xì)胞進(jìn)

9、行處理。實(shí)驗(yàn)分為三組：空白對(duì)照組、紫外線組(10J/cm2)、紫外線和苯甲酸雌二醇共同處理組(4nmol/L+10J/cm2和16nmol/L+10J/cm2)。處理結(jié)束后測(cè)定兩型前膠原Ⅰ型和Ⅲ型的表達(dá)水平。結(jié)果：苯甲酸雌二醇對(duì)體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞增殖無(wú)促進(jìn)作用。RT-PCR結(jié)果表明：苯甲酸雌二醇對(duì)體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞兩型前膠原合成有促進(jìn)作用，且隨著藥物濃度的增高，兩型前膠原的表達(dá)水平有增高趨勢(shì)(p＜0.05)。紫外線組兩型