靜脈注射草苔蟲內酯冷凍干燥脂質體的研究.pdf

1、草苔蟲內酯是來源于海洋生物總合草苔蟲中的大環(huán)內酯類化合物，對多種腫瘤細胞株具有很強的細胞毒作用，草苔蟲內酯是一類極具開發(fā)前景的抗腫瘤藥物。1982年美國Pettit教授所領導的小組首先分離并鑒定了草苔蟲內酯(bryostatin)1，發(fā)現(xiàn)其對P388淋巴瘤白血病細胞具有很強的細胞毒活性。隨后，美國、日本和中國的科學家先后從總合草苔蟲中發(fā)現(xiàn)了19種草苔蟲內酯。其中bryostatin 1已經在美國進入Ⅱ期臨床試驗，bryostatin 4

2、是繼bryostatin 1之后的另外一種處于臨床試驗中的藥物。 草苔蟲內酯是一類具有相同母核的大環(huán)內酯類化合物，本研究所用的草苔蟲內酯其主要成分是bryostatin 4、5、8和10。 但是草苔蟲內酯脂溶性大、用藥量小、不良反應大，阻礙了它作為臨床制劑的應用。為此，本研究以減小草苔蟲內酯的毒副作用、增加其制劑的靶向性和穩(wěn)定性為目的，研制了草苔蟲內酯凍干脂質體。 本研究建立了草苔蟲內酯凍干脂質體的含量和包封率的

3、測定方法，用反相HPLC結合梯度洗脫對草苔蟲內酯凍干脂質體中草苔蟲內酯各主要成分的含量進行控制，草苔蟲內酯各主要成分含量與色譜峰面積線性關系良好，回歸方程分別為A<,bry4>=31.83C-3.88，r=1；A<,brv5>=11.36C-225.60；r=0.9998；A<,bry8>=11.92C-53.17，r=0.9998；A<,brry10>=6.33C-160.22，r=0.9998。實驗的精密度、準確度均符合要求。用離心

4、超濾法測定草苔蟲內酯凍干脂質體的包封率。 本研究用單因素考察和正交設計實驗相結合的方法對草苔蟲內酯凍干脂質體的處方及制備工藝進行了篩選優(yōu)化。對處方中磷脂用量、膽固醇用量、有機相選擇、藥物與磷脂質量比、磷酸鹽緩沖液pH值、α-生育酚用量進行了單因素考察，并對藥物含量、磷脂與膽固醇質量比和磷酸鹽緩沖液濃度三個主要影響因素采用了L<,9>(3<'4>)進行了4因素3水平的正交設計實驗以篩選處方。實驗中以粒徑、包封率和穩(wěn)定性等為考察指標

5、，結果得出草苔蟲內酯凍干脂質體的最佳處方組成為：草苔蟲內酯0.5％、大豆磷脂2％、膽固醇0.29％、α-生育酚0.1％。對超聲均質時間、超聲均質次數(shù)和凍干支撐劑種類等進行了單因素考察，得出最佳制備工藝為：超聲、均質交替三次，每次1 min，凍干支撐劑選擇甘露醇和蔗糖(質量比為3∶2)，預凍6 h，真空干燥24 h。所制備的草苔蟲內酯凍干脂質體為白色固體，平均粒徑在150～300 nm之間，pH 4～6，電位為-20～-40 mV，包封率

6、在95％以上。本研究對草苔蟲內酯凍干脂質體的穩(wěn)定性進行了考察。影響因素實驗表明草苔蟲內酯對溫度、濕度和光照均比較敏感。加速實驗結果表明，在25℃避光條件下放置6個月后，草苔蟲內酯凍干脂質體外觀性狀不發(fā)生變化，主藥含量基本不變，各項參數(shù)不發(fā)生變化，說明草苔蟲內酯制成凍干脂質體后穩(wěn)定性增加。長期實驗結果表明，在6℃避光條件下放置6個月后各項指標無顯著性變化，滿足制劑長期貯存穩(wěn)定性要求。 本文建立了用液質聯(lián)用法測定大鼠血中草苔蟲內酯含