靜脈注射草苔蟲內(nèi)酯冷凍干燥脂質(zhì)體的研究.pdf

1、草苔蟲內(nèi)酯是來源于海洋生物總合草苔蟲中的大環(huán)內(nèi)酯類化合物，對多種腫瘤細(xì)胞株具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒作用，草苔蟲內(nèi)酯是一類極具開發(fā)前景的抗腫瘤藥物。1982年美國Pettit教授所領(lǐng)導(dǎo)的小組首先分離并鑒定了草苔蟲內(nèi)酯(bryostatin)1，發(fā)現(xiàn)其對P388淋巴瘤白血病細(xì)胞具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒活性。隨后，美國、日本和中國的科學(xué)家先后從總合草苔蟲中發(fā)現(xiàn)了19種草苔蟲內(nèi)酯。其中bryostatin 1已經(jīng)在美國進(jìn)入Ⅱ期臨床試驗(yàn)，bryostatin 4

2、是繼bryostatin 1之后的另外一種處于臨床試驗(yàn)中的藥物。 草苔蟲內(nèi)酯是一類具有相同母核的大環(huán)內(nèi)酯類化合物，本研究所用的草苔蟲內(nèi)酯其主要成分是bryostatin 4、5、8和10。 但是草苔蟲內(nèi)酯脂溶性大、用藥量小、不良反應(yīng)大，阻礙了它作為臨床制劑的應(yīng)用。為此，本研究以減小草苔蟲內(nèi)酯的毒副作用、增加其制劑的靶向性和穩(wěn)定性為目的，研制了草苔蟲內(nèi)酯凍干脂質(zhì)體。 本研究建立了草苔蟲內(nèi)酯凍干脂質(zhì)體的含量和包封率的

3、測定方法，用反相HPLC結(jié)合梯度洗脫對草苔蟲內(nèi)酯凍干脂質(zhì)體中草苔蟲內(nèi)酯各主要成分的含量進(jìn)行控制，草苔蟲內(nèi)酯各主要成分含量與色譜峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程分別為A<,bry4>=31.83C-3.88，r=1；A<,brv5>=11.36C-225.60；r=0.9998；A<,bry8>=11.92C-53.17，r=0.9998；A<,brry10>=6.33C-160.22，r=0.9998。實(shí)驗(yàn)的精密度、準(zhǔn)確度均符合要求。用離心

4、超濾法測定草苔蟲內(nèi)酯凍干脂質(zhì)體的包封率。 本研究用單因素考察和正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的方法對草苔蟲內(nèi)酯凍干脂質(zhì)體的處方及制備工藝進(jìn)行了篩選優(yōu)化。對處方中磷脂用量、膽固醇用量、有機(jī)相選擇、藥物與磷脂質(zhì)量比、磷酸鹽緩沖液pH值、α-生育酚用量進(jìn)行了單因素考察，并對藥物含量、磷脂與膽固醇質(zhì)量比和磷酸鹽緩沖液濃度三個(gè)主要影響因素采用了L<,9>(3<'4>)進(jìn)行了4因素3水平的正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)以篩選處方。實(shí)驗(yàn)中以粒徑、包封率和穩(wěn)定性等為考察指標(biāo)

5、，結(jié)果得出草苔蟲內(nèi)酯凍干脂質(zhì)體的最佳處方組成為：草苔蟲內(nèi)酯0.5％、大豆磷脂2％、膽固醇0.29％、α-生育酚0.1％。對超聲均質(zhì)時(shí)間、超聲均質(zhì)次數(shù)和凍干支撐劑種類等進(jìn)行了單因素考察，得出最佳制備工藝為：超聲、均質(zhì)交替三次，每次1 min，凍干支撐劑選擇甘露醇和蔗糖(質(zhì)量比為3∶2)，預(yù)凍6 h，真空干燥24 h。所制備的草苔蟲內(nèi)酯凍干脂質(zhì)體為白色固體，平均粒徑在150～300 nm之間，pH 4～6，電位為-20～-40 mV，包封率

6、在95％以上。本研究對草苔蟲內(nèi)酯凍干脂質(zhì)體的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察。影響因素實(shí)驗(yàn)表明草苔蟲內(nèi)酯對溫度、濕度和光照均比較敏感。加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在25℃避光條件下放置6個(gè)月后，草苔蟲內(nèi)酯凍干脂質(zhì)體外觀性狀不發(fā)生變化，主藥含量基本不變，各項(xiàng)參數(shù)不發(fā)生變化，說明草苔蟲內(nèi)酯制成凍干脂質(zhì)體后穩(wěn)定性增加。長期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在6℃避光條件下放置6個(gè)月后各項(xiàng)指標(biāo)無顯著性變化，滿足制劑長期貯存穩(wěn)定性要求。 本文建立了用液質(zhì)聯(lián)用法測定大鼠血中草苔蟲內(nèi)酯含