中藥復方肺康靈對肺間質纖維化的改善作用及其機制研究.pdf

1、肺間質纖維化(Pulmonary Interstitial Fibrosis，PIF)是一組病因各異且具共同病理特征的一類肺破壞性疾病，其典型的病理特征是成纖維細胞過度增生、細胞外基質蛋白沉積沉積、肺組織結構變形、最終肺功能衰竭。近年，隨著社會環(huán)境特別是大氣污染的加重，其發(fā)病率逐年上升，但是由于缺乏有效的治療策略，肺間質纖維化病人5年生存率明顯低于50％。因此，探索有效治療PIF的藥物是當今醫(yī)藥界研究的熱點。 現(xiàn)代醫(yī)學對PIF發(fā)

2、病機理的研究表明，肺間質纖維化形成與TGF-β的表達及活性失控、Th1/Th2型細胞反應失衡、CD40/CD40配體(以下簡稱CD40/CD40L)系統(tǒng)所致的系列細胞反應密切相關。上述研究表明，肺間質纖維化是一個多因素誘發(fā)的疾病，因此，靶向多個靶點的治療策略成為目前治療肺間質纖維化的熱點方向。 中藥是我國重要資源寶庫，依據中醫(yī)理論，通過近10萬種復方倡導的基于中藥復方多組分物質基礎的聯(lián)合療法已有兩干五百年的歷史。采用中藥復方對P

3、IF進行多靶點的聯(lián)合治療可能會取得較好的療效。但是大多數中藥復方的有效成分尚不明了、作用機理尚待探究，限制其推廣應用。因此，利用現(xiàn)代科學技術手段，結合多學科研究方法，探索中藥復方的有效成分和作用機制，成為中藥復方科學使用的必要條件。 肺康靈是依據中醫(yī)傳統(tǒng)理論組建的中藥復方，在臨床進行了基于病癥的療效觀察，發(fā)現(xiàn)肺康靈對肺間質纖維化各綜合癥狀均有較好的改善作用，其中58例臨床病人療效觀察，總有效率達致68％。為了進一步闡明肺康靈中藥

4、復方的有效成分、探明其具體作用機制，本文在兩項國家自然基金項目的支持下，利用利用現(xiàn)代生物技術、蛋白質組學技術及現(xiàn)代藥理學技術，結合現(xiàn)代醫(yī)學對肺間質纖維化的認識，對中藥復方的作用機制和分子靶點進行了深入系統(tǒng)的研究。 在體外，采用血清藥理學方法，以肺巨噬細胞培養(yǎng)上清、TGF-β作為誘導劑，采用MTT法，流式細胞術，激光共聚焦顯微鏡等多種方法，在體外觀察了肺康靈對肺巨噬細胞培養(yǎng)上清、TGF-β誘導的human embryo pulmo

5、nary fibroblast(HEPF)細胞增殖的抑制作用。結果發(fā)現(xiàn)，肺康靈可以明顯抑制肺巨噬細胞培養(yǎng)上清、TGF-β誘導的HEPF細胞的增殖。進一步研究表明肺康靈可以明顯提高Ⅰ型細胞因子生成，而減少Ⅱ型細胞因子含量，減少炎性因子產生，從而發(fā)揮肺康靈的抗肺纖維化作用。體內通過氣管注射博來霉素復制大鼠肺纖維化模型，肺康靈能較明顯的抑制肺泡巨噬細胞分泌細胞因子的作用。組織病理形態(tài)學結果顯示肺康靈能夠減輕肺炎癥細胞浸潤，減少成纖維細胞增殖及

6、胞外基質沉積，從而減弱肺纖維化的程度。提示，肺康靈對肺纖維化具有明顯的治療作用。 進一步分析發(fā)現(xiàn)，肺康靈抗肺間質纖維化的主要活性成分為多糖類組分。為了深入探討其作用機制，本文整合親和層析、質譜、SDS-PAGE、western blot、免疫沉淀、共定位、SPR等方法，結合復合多糖生物芯片等現(xiàn)代生物、蛋白質組及藥理學技術體系，發(fā)現(xiàn)肺康靈的主要活性組分多糖能同時靶向TGF-β和RIP1蛋白發(fā)揮其抑制TGF-β及CD40系統(tǒng)的相關信