內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激-自噬途徑在胰島β細胞脂毒性損傷中的作用及機制探討.pdf

1、脂毒性在肥胖相關(guān)2型糖尿病的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用。脂毒性不僅引起胰島外周組織的胰島素抵抗,還會給胰島β細胞帶來損傷。β細胞在脂毒性損傷過程中的病理生理變化仍未完全闡明。研究表明,自噬對于β細胞數(shù)量、結(jié)構(gòu)和功能等的維持至關(guān)重要,而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激則是參與介導β細胞功能損傷的重要因素,研究脂毒性與二者的關(guān)系有助于深入認識脂毒性過程。實驗以小鼠胰島細胞瘤MIN6細胞系為模型,通過藥理學手段干預,探討β細胞內(nèi)是否存在由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激引起的自噬,以及該可

2、能途徑在β細胞脂毒性損傷中的作用及相關(guān)機制。
　　1.胰島β細胞內(nèi)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激-自噬途徑及其調(diào)控機制
　　內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導劑Thapsigargin(TG)對MIN6細胞的毒性作用具有劑量依賴性,0.1μM或1μMTG處理36h抑制細胞活力且不利于細胞維持正常形態(tài)。0.1μMTG處理MIN6細胞36h,自噬標志蛋白LC3II表達增加,同時,透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn),細胞內(nèi)自噬結(jié)構(gòu)明顯增加。TG處理不同時間,胰島素誘導的Akt在Ser4

3、73位點的磷酸化逐漸被抑制,但胰島素受體β(IRβ)的表達未受影響。50μMPI3K抑制劑LY294002增加TG誘導的LC3II表達。隨TG處理時間延長,JNK磷酸化水平增加,20μMJNK抑制劑SP600125抑制TG誘導的LC3II表達。相對于單獨TG組,5mM自噬抑制劑3-MA預處理1h,進一步增加TG對細胞活力的抑制(P<0.01)以及凋亡比例,糖刺激的胰島素分泌(GSIS)水平進一步下降(P<0.01)。
　　2.棕櫚

4、酸誘導的β細胞自噬及其與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激關(guān)系的研究
　　棕櫚酸(PA)呈劑量和時間依賴性抑制MIN6細胞活力。0.5mMPA處理24h或36h,BIS(P<0.01)和GSIS(P<0.01)減少。PA處理36h,LC3II表達增加。PA處理后,BiP、CHOP以及p-JNK表達呈增加趨勢。500μM內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑TUDCA或20μMSP600125一定程度抑制PA誘導的LC3II表達增加。3-MA預處理使PA引起的凋亡增加,而TUD

5、CA或自噬誘導劑Rapamycin(50nM)使凋亡減少。油紅染色顯示,PA處理使細胞內(nèi)脂質(zhì)增加。PA逐漸抑制Akt的絲氨酸磷酸化,但未引起IRβ表達下降。50μMLY294002使PA誘導的LC3II表達進一步增加。TUDCA或SP600125可減輕PA對Akt絲氨酸磷酸化的抑制。TUDCA或Rapamycin改善PA引起的細胞活力抑制(P<0.05)以及GSIS水平下降(分別P<0.01,P<0.05)。3-MA預處理使BiP、CH