嗜鹽脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選、酶學(xué)性質(zhì)及基因組文庫(kù)的初步構(gòu)建.pdf

1、極端環(huán)境微生物以其特殊的生理機(jī)能適應(yīng)了高溫、低溫、高酸堿度、高鹽、高壓等惡劣生存條件，獨(dú)特的生存環(huán)境形成了其特有的代謝方式并能夠產(chǎn)生許多具有特殊功能的生物活性物質(zhì)，如極端酶及抗生素等，它們?cè)卺t(yī)藥、食品、農(nóng)業(yè)、化工、環(huán)保等領(lǐng)域有著重要的應(yīng)用前景。 從內(nèi)蒙古錫林浩特地區(qū)鹽湖菌種樣品中篩選到一株嗜鹽脂肪酶高產(chǎn)菌Z4，Z4菌株為革蘭氏陰性桿菌，生長(zhǎng)溫度范圍為30～60℃，最適生長(zhǎng)溫度為42℃，生長(zhǎng)NaCl范圍0.5～5mol/L，最適生

2、長(zhǎng)NaCl濃度為3.5mol/L。結(jié)合生理生化特征和16SrDNA序列分析結(jié)果，將其鑒定命名為HaloterrigenathermotoleransZ4，屬于嗜鹽耐熱古生菌。 Z4菌株的產(chǎn)酶屬于生長(zhǎng)耦聯(lián)型，其最適產(chǎn)酶條件為pH8.0、50℃和NaCl3.5mol/L；Z4菌株可以利用多種誘導(dǎo)物產(chǎn)酶，添加1％橄欖油作為誘導(dǎo)物產(chǎn)酶效果最好。 以p-NPB為底物對(duì)Z4菌株所產(chǎn)脂肪酶性質(zhì)進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示：金屬離子Ba2+、F

3、e2+和Cu2+對(duì)酶具有激活作用，酶活不同程度地提高了20～30％；受PMSF的完全抑制；該酶受到EDTA、SDS和DMSO的抑制，酶活不同程度地下降了20～30％；該酶對(duì)NaCl有較高的依賴專一性，在無鹽條件下發(fā)生不可逆變性，至少需要0.5mol/LNaCl維持活性，并且高濃度NaCl對(duì)于提高其熱穩(wěn)定性有一定作用。醇類物質(zhì)對(duì)于提高酶的熱穩(wěn)定性有一定作用，丙三醇效果最好。該酶對(duì)短鏈底物p-NPB(對(duì)硝基苯酚丁酸酯)最適水解條件為：pH8