血管內(nèi)皮生長因子mRNA在原發(fā)性肺癌中的表達(dá)和意義.pdf_第1頁
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1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文血管內(nèi)皮生長因子mRNA在原發(fā)性肺癌中的表達(dá)和意義姓名:楊榮利申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):胸外科學(xué)指導(dǎo)教師:陳東義2000050114例,平均年齡5744111(范圍34~74歲);鱗癌13例,小細(xì)胞肺癌6例,腺癌10例,大細(xì)胞肺癌3例,混合癌2例;TNM分期I期13例,II期12例,III期9例。實驗方法1總RNA提?。焊髑腥〖s300毫克肺癌組織及正常肺組織,用TRIzol試劑法提取總RNA,于分光光度計下測定RN

2、A濃度,調(diào)整其終濃度為1pg/肛l,然后置于一80℃深低溫冰箱中凍存。2反轉(zhuǎn)錄及PCR擴增:適量總RNA加入OligodT引物,于70℃孵育lO分鐘,再加入buffer、dNTP、RNA酶抑制劑及AMV,于37℃孵育50分鐘。在此基礎(chǔ)之上進行PCR擴增,PCR反應(yīng)體系如下:取RT產(chǎn)物5皿,依次加入緩沖液、VEGF上、下游引物、TaqE、ddH20,然后送PCR儀上擴增。PCR反應(yīng)條件為:95℃變性2分鐘,按94“C1分鐘,55℃1分鐘,

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