靶向mTOR聯(lián)合化療藥物對SGC7901-DDP細胞生長影響的實驗研究.pdf

1、目的：研究mTOR特異性抑制劑RAD001聯(lián)合順鉑對SGC7901/DDP細胞的生長抑制作用，并探討其相關作用機制。
　　 方法：胃癌SGC7901/DDP細胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清、500ng/ml順鉑、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液中，給予RAD001、順鉑干預，1．MTT法檢測各組細胞24h、48h、72h體外增殖情況；2．HE染色觀察藥物作用48h后各組細胞形態(tài)學變化；3．電鏡觀察藥物

2、作用48h后SGC7901/DDP細胞超微結構改變；4．流式細胞術檢測各用藥組作用于SGC7901/DDP細胞48h后細胞凋亡率；5．免疫細胞化學染色及Western-blot檢測各組細胞中P-gp、MRP1、Survivin、Bcl-2和Bax蛋白的表達情況。
　　 結果：1．DDP單獨應用對SGC7901/DDP細胞增殖無抑制作用，與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。RAD001單獨作用于SGC7901/DDP細胞

3、后，細胞增殖受到不同程度抑制，當濃度達到2.5nmol/L時，對細胞的抑制效應與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。RAD001預處理細胞2h后聯(lián)合DDP作用，藥物對細胞增殖的抑制效應與對照組、DDP組及RAD001組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；2．RAD001組、聯(lián)合組作用于SGC7901/DDP細胞后，細胞稀疏，細胞呈現(xiàn)體積變小、形態(tài)不規(guī)則、胞漿濃縮、胞核固縮等形態(tài)學表現(xiàn)；3．電鏡觀察藥物作用48h后細胞超微結

4、構的改變，RAD001(5、10nmol/L)組以及聯(lián)合組細胞體積縮小，胞漿電子密度增高，胞漿內出現(xiàn)空泡狀結構，相鄰細胞間的細胞連接消失，細胞突起減少，部分細胞內可見凋亡小體；4．SGC7901/DDP細胞對DDP促凋亡作用呈現(xiàn)抵抗現(xiàn)象。RAD001(5、10nmol/L)組細胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，凋亡率與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。RAD001預處理細胞后聯(lián)合DDP作用，細胞出現(xiàn)明顯凋亡現(xiàn)象，凋亡率與對照組、DDP組及RAD

5、001組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；5．免疫細胞化學及Western-blot檢測結果顯示：DDP單獨作用于SGC7901/DDP細胞，各蛋白表達情況與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；RAD001作用于SGC7901/DDP細胞，細胞中P-gp、MRP1、Survivin和Bcl-2蛋白的表達下降，Bax表達升高，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。RAD001預處理后與DDP聯(lián)合作用于SGC790