棉酚與甾體激素聯(lián)合用藥對大鼠生精細胞凋亡相關基因表達及生精干細胞功能的影響.pdf

1、經過近十年的不懈努力,我們設計了低劑量棉酚與甾體類激素聯(lián)合用藥的方案并取得了可喜的成果.此種用藥方案用藥量少、服用方便且起效快,并克服了原來單獨用藥所造成的毒副作用和種種不便,從而更加接近于理想化避孕藥的標準.在以往實驗結果的基礎上,我們建立了低劑量棉酚聯(lián)合甲基睪丸酮和炔雌醇的用藥方案,結果表明每日給雄性Wistar大鼠進行食道灌喂12mg/kg棉酚加20mg/kg甲基睪酮和100μg/kg炔雌醇六周可以誘導雄性大鼠不育.停藥六周后服藥

2、的大鼠能夠自主恢復生殖能力,其產生的后代在經過一系列實驗檢測后被證明為各項功能正常.在初步的研究中我們發(fā)現聯(lián)合用藥沒有對喂藥大鼠體內各個臟器造成嚴重損害.對生殖細胞的作用表現為抑制精子產生的數量和質量,并且還能夠破壞精子的運動功能.由于藥物對某個系統(tǒng)產生的影響可能是通過作用于該系統(tǒng)中不同種類和分化程度不同的細胞來實現的,因此為了進一步探討棉酚與甾體激素聯(lián)合用藥的抗生育機理和其安全性,本課題研究了低劑量(12mg/kg/d)和高劑量棉酚(

3、50mg/kg/d)與激素(20mg/kg/d甲基睪酮和100μg/kg/d炔雌醇)聯(lián)合用藥對生精細胞凋亡、凋亡相關基因表達和生精干細胞生長分化功能的影響.在課題的第一部份,首先建立了人工隱睪大鼠模型,此模型大鼠的睪丸通過手術被固定在大鼠的腹腔壁上,手術后睪丸內的生精細胞被腹腔內的溫度誘發(fā)凋亡.提取凋亡生精細胞內的總RNA,利用RT-PCR的方法擴增到了凋亡相關的bax,fas,caspase-3和caspase-9基因片段,并構建入質

4、粒載體作為原位雜交檢測凋亡相關基因表達的探針庫.在研究的第二部分采用了生精干細胞移植的方法檢測了聯(lián)合用藥對喂藥大鼠生精干細胞生長分化功能的影響情況.實驗結果表明,高劑量棉酚加激素(50mg G+H)喂藥組的大鼠喂藥六周后部分曲細精管內出現了生精細胞從小管管壁剝脫的現象,然而在低劑量棉酚加激素(12mg G+H)喂藥組的大鼠曲細精管內生精上皮卻保持完整.生精干細胞移植實驗的結果顯示:在干細胞移植二至三個月后,無論是在接受來自于50mg G