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文檔簡介
1、第一章聲諾維聯(lián)合超聲輻照HXO-44Rb細胞的安全條件
目的:探索超聲造影劑聲諾維(SonoVue)聯(lián)合超聲輻照HXO-44Rb細胞的安全條件。
方法:將培養(yǎng)好的HXO-44Rb細胞以1×105個/孔接種到24孔細胞培養(yǎng)板上,設置4組:第1組:空白對照組(HXO-44Rb細胞);第2組:細胞+聲諾維(造影劑濃度10%、20%);第3組:細胞+超聲輻照(輻照方案:輻照時間40 s、60 s、80 s,輻照聲強0.5 w
2、/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2、2.0 w/cm2);第4組:細胞+超聲輻照+聲諾維組(輻照方案:輻照時間40 s、60 s、80 s,輻照聲強0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2、2.0 w/cm2,造影劑濃度10%、20%)。以上各組每組設置3個復孔。分別于輻照2h、24h、48 h后光鏡下觀察細胞的形態(tài)及生長情況,四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法(MTT)檢測細胞存活情況。
結果:在
3、輻照時間為40 s、60 s、80 s,輻照聲強為0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2,造影劑濃度為10%、20%的情況下,在各個時間點觀察時,腫瘤細胞的外形維持球形,均未發(fā)生明顯改變,仍呈片狀、團狀聚集生長,MTT法檢測細胞存活率最低(98.40±0.21)%,各組間差異無顯著性(P>0.05);輻照時間為40 s、60 s、80 s,輻照聲強為2.0 w/cm2,造影劑濃度為10%、20%的情況下,腫瘤細胞外形
4、腫脹,培養(yǎng)基中可見細胞碎片,細胞間隙較其他組分散,MTT法檢測到細胞的存活率為(89.12±0.97)%,較其它組明顯降低(P<0.05)。
結論:HXO-44Rb細胞在輻照時間為40 s、60 s、80 s,輻照聲強為0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2,造影劑濃度為10%、20%條件下,各組細胞活性無明顯抑制;輻照時間為40 s、60 s、80 s,輻照聲強為2.0 w/cm2,造影劑濃度為10%、2
5、0%的情況下,MTT法檢測細胞的存活率為(89.12±0.97)%,較其它組明顯降低。
第二章 UTMD介導載hsv1-tk-gfp質粒轉染HXO-44Rb細胞實驗條件的優(yōu)化及結果評價
目的:探討超聲造影劑聲諾維(SonoVue)聯(lián)合超聲輻照介導載hsv1-tk-gfp質粒轉染HXO-44Rb細胞的可行性;對比不同輻照條件及造影劑濃度下介導hsv1-tk-gfp質粒轉染HXO-44Rb腫瘤細胞效率的差異,探索最佳轉染
6、條件。
方法:將培養(yǎng)好的HXO-44Rb細胞以1×105個/孔接種到24孔細胞培養(yǎng)板上,設置5組:第1組:空白對照組(HXO-44Rb細胞);第2組:細胞+質粒;第3組:細胞+質粒+超聲輻照(輻照時間:40 s、60 s、80 s,輻照聲強:0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2);第4組:細胞+質粒+聲諾維(造影劑濃度:10%、20%);第5組:細胞+質粒+超聲輻照+聲諾維(輻照時間:40 s、60 s、
7、80 s,輻照聲強:0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2,造影劑濃度:10%、20%)。每組共3個復孔,質粒用量均為1μl/孔。轉染24h,48h后于倒置熒光鏡下觀察綠色熒光分布情況;轉染48 h后用流式細胞儀檢測各組hsv1-tk-gfp質粒轉染率,MTT檢測細胞存活情況。
結果:各組中:第4組中條件:輻照聲強為0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5w/cm2對應的轉染率分別為(3.82±1.0
8、3)%、(6.53±1.07)%,輻照條件為輻照時間60 s、輻照聲強1.5 w/cm2、造影劑濃度為20%下質粒的轉染率最高(14.07±0.21)%,明顯高于其它各組,差異具有顯著性(P<0.05);MTT法檢測各組間細胞存活率在(98.40±0.21)%~(98.47±0.27)%之間,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
結論:輻照時間為60 s、輻照聲強為1.5 w/cm2、造影劑濃度為20%的條件下hsv1-tk-g
9、fp質粒轉染率最高。
第三章 hsv1-tk/GCV自殺基因系統(tǒng)對HXO-44Rb細胞殺傷作用及效果評價
目的:檢測聲造影劑聲諾維(SonoVue)聯(lián)合超聲輻照介導載hsv1-tk-gfp質粒轉染HXO-44Rb細胞后hsv1-tk/GCV自殺基因系統(tǒng)誘導HXO-44Rb腫瘤細胞凋亡的能力。
方法:將培養(yǎng)好的HXO-44Rb細胞以1×105個/孔接種到24孔細胞培養(yǎng)板上,設置3組:第1組:空白對照組(HXO
10、-44Rb);第2組:細胞+昔洛韋(昔洛韋濃度:1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml、1 mg/ml);第3組:細胞+質粒+超聲輻照+聲諾維+昔洛韋(輻照時間:40 s、60 s、80 s,輻照聲強:0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2,造影劑濃度:10%、20%;昔洛韋濃度:1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml、1 mg/ml)。細胞數(shù)量均為1×105個/孔,質粒用量均為1μl/孔。轉染48h
11、后倒置熒光鏡下觀察細胞存活情況,轉染48 h后MTT法檢測細胞的存活率。
結果:各組加入昔洛韋濃度為1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml時,細胞的存活率未見明顯降低;加入1 mg/ml的昔洛韋后,輻照聲強為0.5 w/cm2、1.0 w/cm2,HXO-44Rb細胞的存活率分別為(95.29±0.94)%、(92.58±1.29)%;在1.5 w/cm2、60 s、20%的條件下(55.26±1.21)%,較前兩組條
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