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文檔簡介
1、目的:樹突狀細胞(DC)是目前所發(fā)現(xiàn)的功能最強、也是唯一能激活初始型T細胞的專職抗原提呈細胞,具有強大的激活T細胞和B細胞的能力,控制著體內免疫反應過程,在免疫應答中處于中心地位。 研究表明,腫瘤患者之所以缺乏有力的抗腫瘤免疫應答,原因之一是其體內DC功能缺陷,無法有效提呈腫瘤抗原、激活T細胞識別和殺傷腫瘤細胞。因此,通過體外擴增DC并增強其抗原提呈功能,建立以DC疫苗為基礎的主動特異性免疫治療,已成為腫瘤免疫治療的研究熱點。本
2、實驗研究臍血來源DC的培養(yǎng)方法,觀察子宮內膜癌凍融抗原致敏DC疫苗體外誘導生成的CTL對子宮內膜癌細胞的特異性殺傷效應,探討DC疫苗應用于子宮內膜癌免疫治療的可行性。 方法:取對數(shù)生長期的子宮內膜癌Ishikawa細胞經反復凍融制備成凍融抗原。體外采用Ficoll-Hypaque密度梯度離心法從正常臍血分離出單核細胞,在重組人粒-單核細胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、白細胞介素4(rhIL-4)和腫瘤壞死因子α(rhTNF-
3、α)作用下誘導分化為DC。DC經凍融抗原致敏后形成DC疫苗,用以激活T淋巴細胞及誘導生成抗原特異性CTL。利用倒置顯微鏡觀察DC的生長情況及形態(tài)變化,掃描電鏡觀測成熟DC的表面形態(tài)。采用流式細胞儀對DC經抗原致敏前后的細胞表型進行測定。經混合淋巴細胞反應(MLR)比較抗原致敏DC、未致敏DC及凍融抗原體外刺激同種異體T淋巴細胞增殖的能力。MTT法檢測抗原致敏DC誘導生成的特異性CTL對子宮內膜癌Ishikawa細胞的殺傷作用,并以卵巢癌
4、SK-OV-3細胞和肝癌SMMC-7721 細胞作對照;同時設立未致敏DC組、凍融抗原組及單純淋巴細胞組。ELISA法檢測致敏DC組、未致敏DC組、凍融抗原組和單純淋巴細胞組四組培養(yǎng)上清中IL-12和IFN-γ的含量。 結論: 1.臍血單核細胞在體外經rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-α聯(lián)合誘導下可分化為具有大量指狀突起的DC,該細胞高表達CD1a、CD83、CD80、CD86及HLA-DR,能夠刺激同種異體
5、T淋巴細胞增殖。 2.DC疫苗可在體外刺激同種異體T淋巴細胞增殖及誘導產生針對子宮內膜癌Ishikawa細胞的特異性殺傷作用,表明DC可有效提呈子宮內膜癌抗原,激發(fā)T細胞產生強大的免疫反應,從而發(fā)揮高效而特異的抗腫瘤作用。 3.DC疫苗在體外誘導殺傷子宮內膜癌細胞及分泌細胞因子方面均明顯強于未致敏DC組、凍融抗原組及單純淋巴細胞組,表明DC疫苗用于免疫治療的療效將明顯優(yōu)于單純的DC、“常規(guī)”疫苗及免疫增強劑。 4
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