DNA雙鏈斷裂修復基因XRCC2和XRCC5多態(tài)性與肺癌關系的研究.pdf

1、目的：肺癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，吸煙與職業(yè)危險因素足肺癌的主要原因。與從不吸煙者相比，吸煙者發(fā)生肺癌的風險高出 10～15倍。然而只有一小部分人吸煙者患肺癌，說明對肺癌易感性存在個體差異。推測這些個體間差異是由DNA修復基因突變所致。許多致癌物可以引起DNA損傷，然而通過DNA修復機制，可以恢復基因組完整性。DNA雙鏈斷裂修復(Repair of DNA double-strand breaks，DSB-R)包括剛源重組修復(ho

2、mology recombination，HR)和非同源末端連接(non-homologyend joining，NHEJ)路徑。這些途徑需要諸如RAD5 1、某些X線交義互補基因等參與，這對維持基因組穩(wěn)定性很重要。已經發(fā)現肺癌患者DNA修復能力低于健康人，而越來越多的研究表明DNA修復基因單核苷酸多念性(single nucleotide polymorphism，syP)影響個體間DNA修復能力，其可影響個體腫瘤易感性，并可能對腫瘤

3、分期、淋巴結轉移及化療藥物的敏感性產生影響。對于DSB-R途徑，已經報道XRCC2(Arg188His)突變等位基因明顯增加非細胞肺癌(NSCLC)的發(fā)病風險，XRCC9(Thr297Ile)和ATR(Thr211Met)突變等位基因起保護作用，與NSCLC 風險降低有關。涉及HR和NHEJ XRCC基因的功能正常是保持基因組穩(wěn)定性的重要因素，許多有關XRCC基因敲除的研究證實，那些影響NHEJ的XRCC基因增加淋巴腫瘤的風險，而那些影

4、響HR的XRCC基因導致乳腺癌和可能的婦科腫瘤風險。XRCC2與XRCC5均為DNA雙鏈斷裂修復基因，分別在HR的早期階段和NHEJ中發(fā)揮重要作用。 為了探討XRCC2和XRCC5基因多態(tài)性在肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用，本研究擬檢測XRCC2 基因C41657T、G4234C SNP和XRCC5基因G74582A、C74468A SNPs 在我國北方正常人群和肺癌患者中的分布，探討其與肺癌易感性的關系；以及XRCC2基因C4165

5、7T、G4234C SNP和XRCC5基因G74582A、C74468A SNPs 對肺癌分期及淋巴結轉移的影響；應用MTT法檢測的腫瘤細胞對鉑類藥物化療敏感性分析其多態(tài)性對腫瘤細胞化療敏感性的影響。 方法 1．采用基于醫(yī)院的病例．對照研究方法，收集352例肺癌患者和404例健康對照個體的靜脈抗凝血5 ml，同時記錄其病史及個人相關資料。以蛋白酶K消化．飽和氯化鈉鹽析法提取外周血白細胞DNA，采用聚合酶鏈反應．限制性片段

6、長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restrictionfragment length polymorphism，PCR-RFLP)和引物引入限制性內切酶分析-聚合酶鏈反應(primer-introduced restriction analysis- polymerase chai nreaction，PIRA．PCR)方法檢測XRCC2 C41 657T、G4234C 和 XRCC5C74468A、G7

7、4582A多態(tài)位點，以非條件Logistic回歸法計算經年齡、性別及吸煙狀態(tài)校正的相對風險度的比值比(odds ratio，OR)及其95％可信區(qū)間(95％confidence interval，95％CI)，并分析基因多態(tài)性對肺癌分期和淋巴結轉移的影響。 2．對150例手術肺癌患者應用MTT法檢測腫瘤細胞對鉑類藥物的敏感性，同時應用PCR-RFLP和PIRA-PCR方法檢測XRCC2、XRCC5多態(tài)性，分析基因多態(tài)性對化療藥物

8、敏感性的影響。 3．數據統計分析采用SPSS 11.5版軟件包(SPSS Company，Chicago，Illinois，USA)進行，P<0.05認為有統計學意義。單體型頻率分析采用 EH軟件(1.2 version，Rockefeller University，New York)。 結果 1．肺癌組吸煙個體的比例(66.8％)明顯高于對照組(44.6％)(x<'2>=37.46，P<0.001)；吸煙可顯著

9、增加肺癌的發(fā)病風險(經年齡、性別校正OR=3.44，95％CI=2.37～4.98)。 2．XRCC2 C41 657T 多態(tài)性位點的 T 等位基因頻率在肺癌紕為20.6％，顯著高于健康對照組的14.5％(x<'2>=9.83，P=0.002)。兩組之間的3種基因型(C/C、C/T、T/T)分布亦有顯著性差異(x<'2>=9.45，P=0.009)。與C/C基因型相比，C/T基因型和攜帶T等位基因的基因型(C/T+T/T)可顯著

10、增加肺癌的發(fā)病風險(經性別、年齡和吸煙校正OR分別為1.48和1.53，95％CI分別為1.06～2.06和111～211)。根據病理類型分層分析發(fā)現：XRCC2 C41657T 多態(tài)可能與肺腺癌的發(fā)病風險相關；與C/C基因型相比，C/T基因型和攜帶 T 等位基因的基因型(C/T+T/T)可顯著增加肺腺癌的發(fā)病風險(經性別、年齡和吸煙校正OR 分別為1.85和1.89，95％CI分別為1.18～2.90和1.22～2.92)。根據個體吸

11、煙狀況分層分析發(fā)現：XRCC2 C41657T 多態(tài)位點可能與不吸煙人群的肺癌發(fā)病風險相關；與C/C基因型相比，C/T 基因型和攜帶T等位基因的基因型(C/T+T/T)可顯著增加不吸煙人群患肺癌的風險(經性別和年齡校正OR分別為1.84和1.71；95％CI分別為1.12～3.04和1.05～2.78)。根據個體年齡、腫癌淋巴結轉移和臨床TNM分期分層分析，均未發(fā)現與XRCC2 C41657T多態(tài)性相關。 3．XRCC2 G42

12、34C基因G/G、G/C、C/C基因型和G、C等位基因在肺癌組與健康對照組分布均無顯著性差異(P>0.05)。根據肺癌病理類型分層分析發(fā)現：XRCC2 G4234C 多態(tài)可能與肺小細胞癌的發(fā)病風險相火；與G/G 基因型相比，G/C基因型和攜帶C等位基因的基因型(G/C+C/C)可增加個體患肺小細胞癌的風險(經性別、年齡和吸煙校正OR分別為183和199，95％CI分別為1.01～3.30和1.13～3.52)。根據年齡進行分層分析發(fā)現，

13、XRCC2 G4234C 多態(tài)可能與肺癌的發(fā)病年齡相關，與G/G基因型相比，G/C基因型和攜帶C等位基因的基因型(G/C+C/C)可顯著增加老年人群(年齡≥60歲)患肺癌的風險(經性別和吸煙校正OR分別為1.84和1.90，95％CI分別為1.07～3.15和1.17～3.22)。根據個體吸煙狀況、肺癌淋巴結轉移和臨床分期分層分析均未顯示與 XRCC2 G4234C多態(tài)性相關。 4．應用EH軟件對XRCC2基因兩個SNP位點聯合

14、分析發(fā)現，肺癌組與健康對照組的4種單體型分布具有顯著性差異(x<'2>=10.98，P=0.012)，其中41657T/4234G單體型頻率在肺癌組為17.6％，顯著高于健康對照組的12.6％(x<'2>=8.63，P=0.003)。與41657C/4234G 單體型相比，41657T/4234G單體型可顯著增加肺癌的發(fā)病風險(OR=1.54，95％CI=1.15～2.05)。 結論 1.吸煙顯著增加肺癌的發(fā)病風險。

15、 2.XRCC2 C41657T多態(tài)與肺癌的發(fā)病風險相關，進一步分析發(fā)現，這種作用在肺腺癌組更加明顯。C/T基因型和攜帶 T 等位基因的基因型(C/T+T/T)可顯著增加肺癌尤其是肺腺癌的發(fā)病風險。 3.攜帶XRCC2 C41657T T 等位基因的基因型(C/T+T/T)和C/T基因型可顯著增加不吸煙人群患肺癌的風險。 4.XRCC2 G4234C多態(tài)與肺小細胞癌的發(fā)病風險相關，攜講C 等位基因的基因型(G/C+C

16、/C)和G/C基因型可顯著增加肺小細胞癌的發(fā)病風險。 5.XRCC2 G4234C多態(tài)位點的攜帶C等位基因的基因型(G/C+C/C)和G/C基因型可顯著增加老年人群(年齡≥60歲)患肺癌的風險。 6.與XRCC2 41657C/4234G單體型相比，41657T/4234G單體型可顯著增加肺癌的發(fā)病風險。 7．XRCC2 C41657T、G4234C多態(tài)性與肺癌淋巴結轉移和臨床分期無關。 8．XRCC5

17、C74468A的攜帶A等位基因個體(A/C+A/A)對肺癌患者由Ⅰ期向Ⅱ期發(fā)展具有一定的保護作用。 9．XRCC5 G74582A多態(tài)性與肺癌易感性之間無相關性。 10．XRCC5 C74468A、G74582A多態(tài)位點的聯合分析未發(fā)現其單體型與肺癌易感性相關。 11．XRCC2 C41657T SNP與患者腫瘤組織對CBP和DDP的敏感性相關；攜帶T等位基因(C/T+T/T 基因型)的患者，其腫瘤細胞對CBP的