草分枝桿菌對兒童急性白血病T淋巴細胞影響的研究.pdf

1、目的：探討草分枝桿菌F.U.36混懸注射液(烏體林斯，Utilin's，)對兒童急性白血病外周血T淋巴細胞功能的影響。 方法：采用Ficoll-Hypaque法(密度梯度離心法)分離急性白血病患兒外周血單個核細胞(PBMC)，對照組以RPMIl640培養(yǎng)液培養(yǎng)PBMC，實驗組分為：實驗1組：植物血凝素(PHA)+重組人白細胞介素-2(rhIL-2)；實驗2組：PHA+rhIL-2+Utilin's1.72ng/ml：實驗3組：P

2、HA+IL-2+Utilin's2.58ng/ml分別誘導PBMC。光學顯微鏡下每同觀察細胞生長情況，至培養(yǎng)第3天，計數(shù)各組細胞數(shù)量，并應用流式細胞儀檢測各組細胞免疫表型。ELISA法檢測培養(yǎng)上清中IL-10、IFN-Y的分泌情況；另將培養(yǎng)3天后的T淋巴細胞與HL-60共孵育72h，觀察不同組別淋巴細胞殺瘤作用的不同，MTT法檢測其殺傷活性。 結果:1.細胞數(shù)量：各實驗組均得到不同數(shù)量的T淋巴細胞，其數(shù)量明顯高于對照組(t1:9

3、.74；t2:15.95；t3；17.84.p均<0.01)。實驗2組較實驗1組細胞數(shù)量明顯增多(t=3.01.p<0.01)實驗3組組較實驗1組、實驗2組細胞數(shù)量亦明顯增多(t：8.54；5.44.p<0.01)。2.免疫表型：實驗各組CD3、CD4、CD8的表達率均高于對照組；實驗1組與實驗2組之間CD4差異無統(tǒng)計學意義，但實驗2組CD3、CD8表達率高于實驗1組；實驗3組CD3、CD4、CD8較實驗1組與實驗2組均明顯提高，且細胞

4、數(shù)量明顯增多(p均<0.01)。3.細胞因子檢測：實驗各組培養(yǎng)上清中IL-10、IFN-γ的表達量較對照組相比有顯著統(tǒng)計學意義，p均<0.01；實驗各組在IL-10表達量方面組間相比差異均有統(tǒng)計學意義，p均<0.01，且隨著加入Utilin’s濃度的增加，IL-10的表達量明顯增加，p<0.01；IFN-γ表達方面：實驗3組較實驗1組、實驗2組比較差異有統(tǒng)計學意義，p均<0.01，實驗2組較實驗1組比較差異有統(tǒng)計學意義，p<0.01。4

5、.殺瘤活性：實驗各組與對照組殺傷活性比較差異均有顯著統(tǒng)計學意義，P均<0.01；而實驗2組、3組相比較，隨著Utilin’s濃度的增加，殺傷活性增大，(t=6.51，P<0.01，且均較實驗1組殺傷活性明顯增加，(t分別為：24.06，24.63；p<0.001)。 結論：1.Utilin's能促進急性白血病患兒T淋巴細胞擴增和成熟，且隨著其濃度的增加作用進一步增強。Utilin's誘導后的T淋巴細胞的增殖和分泌IL-10、IF