豬CARD6、CARD7和RIP2基因克隆及序列分析研究.pdf

1、CARD6蛋白廣泛存在于除腦組織以外的所有組織中，在心肌和骨骼肌組織中表達最多，它存在于細胞核和核DNA中。CARD6通過調(diào)節(jié)RIP激酶家族的功能來調(diào)節(jié)NF-κB激活作用，由于受到CARD4，Rip2的抑制作用的影響，CARD6基因作為NF-κB激活作用的選擇性調(diào)節(jié)因子，與CARD家族的所有成員一道，共同參與機體的炎癥應(yīng)答和遺傳性免疫調(diào)節(jié)。 CARD7（又稱NALP1/DEFCAP/NAC）是NOD家族中唯一含有N末端pyri

2、n區(qū)域，同時連接著NBD-LRR和C末端CARD區(qū)域的蛋白，由“apoptosome”和“inflammasome”組成的大蛋白合成物，CARD7的mRNA在各種組織中廣泛表達，在血粒細胞、胸腺、脾和心臟中表達最高，在脫噬作用、炎癥性胱門蛋白酶激活和胱門蛋白酶原-1β進程中均扮演著重要作用。 RIP2是核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域胞漿蛋白家族成員之一，它是一種在C終點含有氨基末端激酶域的絲氨酸/蘇氨酸激酶，介于激酶域和CARD域之間

3、的媒介領(lǐng)域。其生理和病理作用是調(diào)解參與多個NF-κB的活化，對先天的和適宜性免疫反應(yīng)具有重要意義的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。 本研究應(yīng)用比較基因組學(xué)的相關(guān)原理和方法，利用豬CARD6基因、CARD7基因和RIP2基因的mRNA序列，采用RT-PCR法，首次得到了豬相應(yīng)基因的CDS部分序列。同時利用GENBANK數(shù)據(jù)庫中不同物種三種基因的CDS區(qū)域序列及氨基酸序列，運用Mega4．0軟件構(gòu)建三種基因DNA序列的NJ關(guān)系樹。結(jié)果顯示：

4、（1）從豬骨骼肌組織中克隆得到了2222bp的豬CARD6基因cDNA序列，與人、猩猩、牛、馬及鼠的核苷酸同源性分別為：82．5％、82．6％、85．3％、84．0％及71．7％，氨基酸同源性分別為：72．4％、72．3％、78．1％、73．8％及61．6％。（2）從豬腎臟組織中克隆得到了一個1836bp的豬CARD7基因cDNA序列，與人、牛、猩猩及鼠的核苷酸同源性分別為：74．3％、78．4％、74．6％及62．0％，氨基酸同源性分