課題一 鸚鵡熱嗜衣原體MOMP基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建和免疫效果的初步研究;課題二 衣原體分子甄別技術(shù)的建立.pdf

1、鸚鵡熱嗜衣原體(Cps)是一類專性細(xì)胞內(nèi)寄生的人獸共患病病原體，能引起人和動(dòng)物多種疾病。Cps對(duì)鳥類、家禽和家畜有很強(qiáng)的感染性。人類不是Cps的天然宿主，但寵物飼養(yǎng)者、養(yǎng)禽廠工人等與家禽家畜密切接觸者可通過吸入具有感染性的分泌物而感染，引起肺炎和敗血癥。 Cps主要外膜蛋白(MOMP)是呈感染性的原體(EB)表面的主要膜蛋白，在原體的外膜蛋白中占60％左右。氨基酸序列分析表明，MOMP的結(jié)構(gòu)是五個(gè)保守區(qū)夾著四個(gè)可變區(qū)(VD)，血

2、清型特異的抗原決定簇位于VSl或VS2，而種或亞種特異的抗原決定簇位于VS4。 本研究采用PCR法獲得了CpsCE9株MOMP基因片斷，并將其克隆到真核表達(dá)載體pcDNA3．1(+)中，構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒。通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)以及酶切方法對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行了鑒定，結(jié)果表明外源基因已經(jīng)成功地插入到真核表達(dá)載體pcDNA3．1(+)中。通過對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行序列測(cè)定，結(jié)果表明目的基因已經(jīng)成功地克隆到真核表達(dá)載體pcDNA3．1(+)

3、上，且表達(dá)載體含有目的基因正確的開放讀碼框。測(cè)序結(jié)果與Cps其它菌株進(jìn)行序列比對(duì)可知，該序列只有三個(gè)堿基突變，重組質(zhì)粒上MOMP基因的氨基酸序列同標(biāo)準(zhǔn)序列的同源性為99．6％。起始密碼子ATG后的第一個(gè)堿基為G，前面的堿基為AAC，目的基因上已經(jīng)含有外源基因轉(zhuǎn)錄必需的Kozak序列。 利用磷酸鈣法介導(dǎo)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染COS一7細(xì)胞，WesternBlot方法鑒定外源蛋白在COS一7細(xì)胞中的表達(dá)情況，結(jié)果表明外源基因可以成功的在COS