用于RNA干擾的質粒載體的構建及檢測.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩57頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、 本課題的目的就在于構建一種在實驗室現(xiàn)有條件下易于大量擴增和應用的RNA干擾載體，為后續(xù)在人類細胞中進行各種RNA干擾研究奠定基礎。我們對克隆載體pUC19質粒進行了改造，使其可以在真核細胞內復制并且具有新霉素抗性標記，然后通過PCR從人類基因組中得到人U6snRNA啟動子，將其連入經過改造的pUC19中，構建出RNA干擾質粒pUC19NU。為了檢測該質粒誘發(fā)的RNA干擾效應，我們針對增強綠色熒光蛋白和p53蛋白的基因，分別設計了

2、兩段可以轉錄出短發(fā)夾環(huán)狀RNA的DNA模板序列，連入載體pUC19NU中，分別轉染HeLa細胞和KMB-17細胞。熒光顯微鏡下不同時段觀察HeLa細胞中增強綠色熒光蛋白的表達量，發(fā)現(xiàn)所構建的載體幾乎可以完全抑制細胞內增強綠色熒光蛋白的表達，并且這種抑制作用是特異的。不同時間收集KMB-17細胞內的蛋白，經WesternBlot檢測，發(fā)現(xiàn)實驗組細胞內p53蛋白的表達量較陰性對照組有顯著下降，說明所構建的載體對p53蛋白的表達也有良好的干擾

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論