Hib PRP-TT結(jié)合疫苗的制備及其免疫原性研究.pdf

1、流感嗜血桿菌是引起嬰幼兒呼吸系統(tǒng)原發(fā)性感染和病毒性感染時引起繼發(fā)
　　本試驗首先對Hib49247菌種特性及傳代穩(wěn)定性進行試驗觀察；然后對其發(fā)酵及提糖條件進行優(yōu)化，所得到純化的Hib莢膜多糖抗原通過己二酸二肼（ADH）與破傷風類毒素（TT）蛋白共價結(jié)合，制備b型流感嗜血桿菌結(jié)合物。
　　試驗結(jié)果表明,Hib49247菌種具有其菌種特性,發(fā)酵葡萄糖,不發(fā)酵乳糖；且傳代穩(wěn)定；發(fā)酵Hib時培養(yǎng)基中生長因子的加量為Hemin2mg/

2、100mL,NAD1.5mg/100mL,初始pH值應(yīng)為7.2，種子液應(yīng)在OD550nm下光吸收值0.4～0.6之間，發(fā)酵過程中溶氧應(yīng)控制在20％，培養(yǎng)6～8小時為宜，通過100L發(fā)酵罐的中試對所得參數(shù)進行驗證發(fā)酵參數(shù)具有良好的重復性和穩(wěn)定性；Hib多糖純化中，采用冷酚抽提4次，30%乙醇沉核酸，65%乙醇沉糖的條件最佳；對Hib多糖衍化工藝選擇最有水平為pH11.0±0.2，活化時間為30min,溴化氰加0.5mg/mL；結(jié)合反應(yīng)多糖

3、與蛋白質(zhì)量比為1∶1所得到的結(jié)合物各項指標均合格且較穩(wěn)定；并通過以12.5μg多糖和含2.5μg多糖的結(jié)合物經(jīng)腹腔免疫Balb/c小鼠，用ELISA法檢測小鼠血清PRP抗體水平；并對Hib PRP-TT結(jié)合物對其過敏原性及TT毒性進行觀察。免疫原性試驗結(jié)果表明結(jié)合物免疫小鼠能誘導出高水平的血清PRP抗體，而單獨用多糖免疫小鼠未能誘導高水平的抗體；過敏原性實驗表明制備的PRP-TT結(jié)合物不會引起過敏性癥狀；TT毒性逆轉(zhuǎn)實驗結(jié)果表明TT均未