IL-35在活動性肺結(jié)核患者外周血中的表達及其臨床意義.pdf

1、IL-35是新近發(fā)現(xiàn)的免疫抑制性細胞因子，由EB13和p35亞基組成。已報道鼠調(diào)節(jié)性T細胞（RegulatoryT cells，Treg）和經(jīng)抗原刺激的人Treg均能分泌IL-35，但未經(jīng)抗原刺激的人Treg卻不能分泌IL-35。最近有學者發(fā)現(xiàn)B細胞亦能分泌IL-35。IL-35可負向調(diào)節(jié)免疫功能，在維持機體內(nèi)環(huán)境免疫平衡和免疫性/炎癥性疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，但其在結(jié)核病中的作用尚未見報道。本研究以活動性肺結(jié)核患者（Active

2、 pulmonary tuberculosis，APTB）為研究對象，采用ELISA、實時熒光定量PCR和流式細胞術(shù)檢測IL-35在活動性肺結(jié)核患者血漿中的水平及其在不同種類白細胞中的表達，分析抗結(jié)核治療對其的影響，并探討其臨床意義，從而為結(jié)核病的預防、診斷及臨床治療提供理論依據(jù)。
　　[目的]
　　檢測IL-35在活動性肺結(jié)核患者血漿中的含量及其在外周血不同種類白細胞中的表達情況并探討其臨床意義。
　　[方法]

3、>　　1.研究對象:按臨床診斷標準選擇活動性肺結(jié)核患者作為研究對象，并根據(jù)不同臨床資料對患者進行分組，如抗結(jié)核藥物(Antituberculosis drugs，ATDs)治療前/后，痰涂片結(jié)核分枝桿菌陽性/陰性，患者性別等。采用健康志愿者(Healthyvolunteers，HV)作為對照。
　　2.樣本收集和處理:采用EDTA-K2抗凝，收集活動性肺結(jié)核患者入院治療前和治療后空腹血樣，健康志愿者體檢時空腹血樣，分離血漿并采用淋

4、巴細胞分離液分離外周血單個核細胞。
　　3.血漿IL-35水平的檢測:采用人IL-35 ELISA檢測試劑盒，檢測血漿IL-35含量。
　　4.IL-35亞基mRNA的檢測:提取活動性肺結(jié)核患者和正常人外周血白細胞及外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄后，采用實時熒光定量PCR檢測IL-35的兩個亞基p35和EBI3 mRNA的表達情況。
　

5、　5.IL-35在不同類型淋巴細胞中的表達:分離活動性肺結(jié)核患者和正常人外周血PBMC，采用多色熒光抗體結(jié)合流式細胞術(shù)檢測并分析樣本中IL-35兩個亞基p35和EBI3在活動性肺結(jié)核患者外周血T細胞及其亞群，以及在B細胞中的表達，并結(jié)合臨床資料分析其臨床意義。
　　[結(jié)果]
　　1.ELISA檢測結(jié)果顯示:活動性肺結(jié)核患者血漿IL-35高于健康對照組，治療后組低于治療前組，痰涂結(jié)核分枝桿菌陽性（痰涂陽性）患者組高于痰涂陰性患

6、者組。
　　2.Real time PCR檢測結(jié)果顯示:活動性肺結(jié)核患者外周血總白細胞及外周血單個核細胞中p35與EBI3的mRNA表達均高于健康對照組，且EBI3 mRNA在外周血總白細胞中表達高于其在PBMC中的表達。此外，活動性肺結(jié)核患者外周血總白細胞中治療后組p35 mRNA表達低于治療前組，痰涂陽性患者組高于痰涂陰性患者組;PBMC中治療后組EBI3 mRNA表達低于治療前組，p35和EBI3 mRNA表達痰涂陽性患者組

7、均高于痰涂陰性患者組。
　　3.流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示:活動性肺結(jié)核患者外周血p35+CD4+T細胞和EBI3+CD4+T細胞比例均高于健康對照組，且兩者在活動性肺結(jié)核患者中呈正相關(guān)，在健康志愿者中未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)。痰涂陽性患者p35+CD4+T細胞比例高于痰涂陰性患者，治療后組低于治療前組。此外，活動性肺結(jié)核患者p35+CD4+CD25+T細胞和EBI3+CD4+CD25+T細胞比例均高于健康對照組，兩者在活動性肺結(jié)核患者中呈正相

8、關(guān)?；顒有苑谓Y(jié)核患者中痰涂陽性患者p35+CD4+CD25+T細胞比例和EBI3+CD4+CD25+T細胞比例均高于痰涂陰性患者組，治療后組EBI3+CD4+CD25+T細胞比例低于治療前組;但幾乎沒有檢測到同時表達p35和EBI3的CD4+CD25+T細胞。
　　流式細胞術(shù)檢測結(jié)果還顯示:體外經(jīng)BCG刺激后，活動性肺結(jié)核患者外周血單個核細胞中p35+CD19+B細胞、EBI3+CD19+B細胞及p35+EBI3+CD19+B細胞

9、比例均明顯上調(diào)，且痰涂陽性患者EBI3+CD19+B/p35+EBI3+CD19+B細胞比例分別高于痰涂陰性患者，治療后組分別低于治療前組。
　　[結(jié)論]
　　1.活動性肺結(jié)核患者血漿IL-35含量升高，治療后下降，痰涂陽性患者顯著高于痰涂陰性患者，且IL-35兩個亞基p35和EBI3 mRNA在活動性肺結(jié)核患者外周血白細胞中的表達均顯著升高，提示IL-35可能與活動性肺結(jié)核患者免疫功能障礙有關(guān)。
　　2.p35和EB

10、I3單亞基在活動性肺結(jié)核患者T細胞及CD4+CD25+T亞群的表達均升高，且兩者的表達存在正相關(guān)，提示IL-35及其亞基可能參與T細胞介導的抗結(jié)核細胞免疫調(diào)節(jié)。但由于幾乎沒有檢測到同時表達IL-35兩個亞基的T細胞及T細胞亞群，提示T細胞及其亞群有可能不是活動性肺結(jié)核患者外周血IL-35的主要來源。
　　3.BCG刺激可顯著上調(diào)IL-35及其兩個亞基在B細胞中的表達，且痰涂陽性患者高于痰涂陰性患者，治療后組低于治療前組，提示活動性