舒林酸對結腸癌細胞NF-kB信號通路的干預作用及機制探討.pdf

1、舒林酸是臨床上廣泛使用的抗炎藥，大量的實驗及臨床研究結果表明其還具有一定的抗腫瘤作用。NF-κB是炎癥與腫瘤相關的轉錄因子，活化后能與許多基因啟動子區(qū)域的固定核苷酸序列結合而啟動基因轉錄，其異常表達與腫瘤的發(fā)生、轉移、以及腫瘤細胞的抗凋亡作用相關。因此，我們采用體內(nèi)外實驗研究舒林酸對結腸癌HT-29細胞NF-κB信號通路的干預作用及其作用機制，從而進一步調控其下游的信號轉導、細胞凋亡及腫瘤侵襲轉移等，為舒林酸的臨床應用提供理論依據(jù)。

2、r>　　目的:研究非甾體抗炎藥舒林酸的抗腫瘤作用及作用機制，為惡性腫瘤臨床治療提供理論基礎。
　　實驗方法:體外細胞實驗:以MTT法評價舒林酸硫化物對人結腸癌HT-29細胞的生長抑制作用;應用碘化丙啶染色法檢測舒林酸硫化物對細胞周期的影響;應用JC-1熒光探針檢測結腸癌HT-29細胞中線粒體膜電位的變化。體內(nèi)實驗:建立人HT-29裸小鼠異種移植瘤模型，分組給藥后取腫瘤組織，觀察舒林酸抑瘤作用，計算抑瘤率;應用TUNEL法檢測舒林酸

3、對腫瘤組織凋亡的影響;應用蛋白質印跡法及免疫組織化學法分別檢測腫瘤組織中NF-κB及相關蛋白的表達水平;應用蚤白質免疫印跡法檢測腫瘤組織中凋亡相關蛋白的表達水平,以RT-PCR法檢測miRNA-9、miRNA-10b、miRNA17及miRNA21表達水平。以染色質免疫共沉淀法檢測NF-κB p65與miRNA-9、miRNA10b、miRNA-17及miRNA-21的啟動子序列的結合能力。
　　結果:體外細胞實驗:舒林酸硫化物能

4、抑制人結腸癌HT-29細胞的增殖;細胞周期檢測結果顯示，舒林酸硫化物能使HT-29細胞G1/G0期的比例增加，在一定程度上將HT-29細胞阻滯在G1/G0期，抑制DNA合成，從而抑制細胞增殖，且有劑量依賴性;線粒體膜電位檢測結果顯示，舒林酸硫化物劑量依賴性地使結腸癌HT-29細胞的線粒體膜電位下降，從而促進細胞凋亡。
　　體內(nèi)實驗:舒林酸25 mg/kg、50 mg/kg和阿司匹林300 mg/kg組對腫瘤生長抑制率分別為46.1

5、1％(P＜0.01)、56.29％(P＜0.01)和20.36％(P＜0.05)。應用TUNEL法檢測人結腸癌HT-29移植瘤組織的凋亡變化，發(fā)現(xiàn)舒林酸能有效誘導腫瘤組織細胞凋亡。與對照組比較，舒林酸兩劑量組p-NF-κB p65、p-IκBα的表達水平明顯降低;IκBα總體表達水平增高。對照組NFκB p65在細胞質和細胞核中都有明顯表達，舒林酸兩劑量組NFκB p65的表達主要集中在細胞質，即舒林酸能抑制NFκB p65由細胞質轉入

6、細胞核。與對照組相比，舒林酸組p-EGFR、EGFR、p-ERK、ERK的表達水平均明顯降低;Bax、PARP的表達水平增高;Caspase-9、Caspase-3的表達水平降低。舒林酸25 mg/kg、50 mg/kg和阿司匹林組對人HT-29結腸癌組織中miRNA-9的表達水平分別降低了70.58％(P＜0.01)、71.55％(P＜0.01)和21.04％(P＜0.05);對miRNA-10b的表達水平分別降低了71.62％(P＜

7、0.01)、73.46％(P＜0.01)和32.57％(P＜0.01);對miRNA-17的表達水平分別降低了67.10％(P＜0.01)、74.80％(P＜0.01)和19.90％(P＜0.05);對miRNA-21的表達水平分別降低了73.70％(P＜0.01)、74.90％(P＜0.01)和39.40％(P＜0.01)。NF-κB p65能夠識別miR-9、miR-10b、miR-17及miR-21的啟動子序列，并與之結合。