溶血磷脂酸(LPA)誘導(dǎo)人口腔鱗癌細(xì)胞中整合素β6表達(dá)的分子機(jī)制.pdf

1、目的：整合素αvβ6是由αv和β6亞單位組成的上皮特異性表達(dá)異二聚體，在口腔鱗癌中異常高表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。由于β6只能與αv亞基組成二聚體，因此β6是調(diào)控αvβ6表達(dá)的關(guān)鍵亞基。LPA是一種存在于唾液和血液并具有多種生物活性的甘油磷脂，能促進(jìn)細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。我們課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)LPA能上調(diào)正常上皮細(xì)胞整合素β6表達(dá)，但尚不清楚口腔鱗癌中LPA是否上調(diào)αvβ6的表達(dá)促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。因此，本研究先研究LPA

2、是否能誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞系SAS細(xì)胞整合素β6表達(dá)，并探討LPA誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞系SAS細(xì)胞整和素β6表達(dá)的分子機(jī)制，為進(jìn)一步探究整合素avβ6在口腔鱗癌中過度表達(dá)的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　方法：用定量PCR和Western blot檢測LPA誘導(dǎo)SAS細(xì)胞后β6的mRNA和蛋白表達(dá)量。用特異性抑制劑和siRNA尋找參與LPA誘導(dǎo)SAS細(xì)胞β6表達(dá)上調(diào)的受體及其偶聯(lián)的Gα亞基。用雙熒光報告系統(tǒng)檢測啟動子活性，探究β6啟動子上的LPA

3、應(yīng)答元件。用Chip方法和轉(zhuǎn)錄因子特異性siRNA確定參與LPA誘導(dǎo)β6表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。最后用特異性抑制劑探究GPCR轉(zhuǎn)激活EGFR是否參與β6的表達(dá)，在體外研究LPA上調(diào)口腔鱗癌β6表達(dá)的機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1. LPA能上調(diào)SAS細(xì)胞β6的mRNA和蛋白表達(dá)。
　　2. LPA1/3抑制劑KI16425抑制LPA上調(diào)SAS細(xì)胞β6 mRNA和蛋白的表達(dá)。轉(zhuǎn)染LPA1 siRNA阻斷LPA上調(diào)SAS細(xì)胞β6 mR

4、NA的表達(dá)。
　　3. Gi/O抑制劑PTX抑制LPA上調(diào)SAS細(xì)胞β6 mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　4. LPA不能增加SAS細(xì)胞β6 mRNA的穩(wěn)定性。LPA上調(diào)SAS細(xì)胞β6啟動子活性。
　　5.β6基因轉(zhuǎn)錄起始位點-150~+22 bp處存在SMAD2/3和ETS家族轉(zhuǎn)錄因子潛在結(jié)合位點參與LPA增加β6的啟動子活性。
　　6. LPA促使轉(zhuǎn)錄因子SMAD3和ETS-1結(jié)合到β6啟動子。轉(zhuǎn)染SMAD3和E

5、TS-1 siRNA阻斷LPA誘導(dǎo)SAS細(xì)胞β6 mRNA的表達(dá)。
　　7. LPA通過LPA1和Gi/O促進(jìn)SAS細(xì)胞 SMAD3和ETS-1磷酸化，并結(jié)合到β6啟動子。
　　8. LPA增加SAS細(xì)胞 EGFR磷酸化水平。EGFR特異性抑制劑AG1478抑制LPA誘導(dǎo)SAS細(xì)胞β6的mRNA和蛋白表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1. LPA通過LPA1及其偶聯(lián)的Gi/O上調(diào)口腔鱗癌細(xì)胞系SAS細(xì)胞β6的表達(dá)。