穿心蓮內(nèi)酯抗大鼠銅綠假單胞菌肺部感染作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：建立銅綠假單胞菌(PA)肺部感染模型，動(dòng)態(tài)觀察Toll樣受體4(TLR4)mRNA在大鼠銅綠假單胞菌感染中的表達(dá)變化，并探討穿心蓮內(nèi)酯在銅綠假單胞菌肺部感染時(shí)的抗菌作用及可能的作用機(jī)制。
　　方法：采用氣管滴注法給予銅綠假單胞菌生理鹽水菌懸液，建立大鼠銅綠假單胞菌肺部感染模型。設(shè)不同時(shí)間段感染組(0h、24 h、48 h、72h、96 h)，分別取大鼠靜脈血及肺泡灌洗液進(jìn)行白細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù)，同時(shí)取肺組織做蘇木精-伊紅（H

2、E）染色，觀察大鼠肺組織病理變化，并采用RT-PCR方法，檢測(cè)肺組織勻漿中TLR4 mRNA的表達(dá)水平變化，分析結(jié)果，并篩選一峰值點(diǎn)。
　　分別于感染后的24 h、48 h，通過腹腔注射方式給予不同劑量的穿心蓮內(nèi)酯(5μg/g、10μg/g、15μg/g、20μg/g)及相應(yīng)的溶劑二甲基亞砜(DMSO)，于上述峰值點(diǎn)分別取大鼠血液、肺泡灌洗液、肺組織等標(biāo)本，檢測(cè)各指標(biāo)的水平變化。
　　結(jié)果：銅綠假單胞菌感染后，大鼠血液白細(xì)胞

3、總數(shù)于24h下降，隨后上升并于48 h達(dá)峰值，中性粒細(xì)胞于感染后24 h上升，48h上升達(dá)峰值，后下降，淋巴細(xì)胞24h下降，后逐步上升，中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞的比值呈現(xiàn)先上升后下降的變化趨勢(shì)，肺泡灌洗液中白細(xì)胞上升于48 h達(dá)峰值，肺組織TLR4 mRNA的表達(dá)水平也于48 h達(dá)峰值;且48 h組血白細(xì)胞、肺泡灌洗液白細(xì)胞和肺組織勻漿液中TLR4 mRNA水平較其他組高(P＜0.05)，因此選48 h用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　給于穿心蓮內(nèi)

4、酯后，穿心蓮內(nèi)酯各劑量組血液中白細(xì)胞總數(shù)與PA組和DMSO組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，隨著穿心蓮內(nèi)酯劑量的增加，白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞下降，呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，分別為r=-0.93，P＜0.05;r=-0.507，P＜0.05;肺泡灌洗液中白細(xì)胞總數(shù)與PA組和DMSO組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），隨著穿心蓮內(nèi)酯劑量的增加，白細(xì)胞總數(shù)下降，呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，分別為r=-0.90，P＜0.05;肺組織病理鏡下觀察各穿心蓮內(nèi)酯組

5、較PA組和DMSO組肺泡壁破壞減輕，中性粒細(xì)胞和纖維蛋白滲出減少;各穿心蓮內(nèi)酯劑量組TLR4 mRNA的表達(dá)與PA組和DMSO組也有所下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），各劑量組間相比15μg/g組和20μg/g組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，其他組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：銅綠假單胞菌肺部感染可誘導(dǎo)TLR4 mRNA的表達(dá)變化;穿心蓮內(nèi)酯可有效地抑制銅綠假單胞菌誘導(dǎo)的肺部感染，其抑菌機(jī)制可能通過調(diào)控TLR