血管緊張素Ⅱ—血管緊張素Ⅱ1型受體途徑在介導急性肺損傷大鼠肺部炎癥反應中的作用研究.pdf

1、第一部分，目的：探討血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)介導大鼠肺部炎癥反應激活的作用及其受體途徑。 方法：清潔級SD大鼠24只，隨機分為4組：①對照組：持續(xù)皮下注射與AngⅡ等體積的生理鹽水72 h；②AngⅡ組：皮下注射AngⅡ1μg·kg<'-1>．min<'-1>持續(xù)72 h；③AngⅡ+氯沙坦組：Ang Ⅱ注射前24 h及Ang Ⅱ持續(xù)皮下注射的72 h過程中，予氯沙坦10 mg.kg<'-1>·d<'-1>灌胃；④氯沙坦組：氯

2、沙坦10mg.kg<'-1>·d<'-1>灌胃4 d。光鏡觀察肺組織病理改變并測定肺組織肺濕/干重比(W/D)。凝膠遷移率改變電泳法(EMSA)測定肺組織核因子-κB(NF-κB)活性，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測肺組織腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、Ang Ⅱ 1型受體(ATR1)mRNA表達水平，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血漿中血管性血友病因子(vWF)的含量反映內(nèi)皮細胞損傷，比色法測定髓過氧化物酶(MPO)和丙二

3、醛(MDA)含量，TUNEL分析肺組織細胞凋亡情況，Western Blot方法檢測肺組織ATR1蛋白表達水平。 結(jié)果：AngⅡ組大鼠肺W/D為(4.80±0.23)，明顯高于對照組(4.26±0.34)、Ang Ⅱ+氯沙坦組(4.13±0.48)和氯沙坦組(3.80±0.48)(P<0.05)。Ang Ⅱ+氯沙坦組肺W/D明顯低于AngⅡ組，但與對照組和氯沙坦組相比無顯著差異(P>0.05)。AngⅡ可導致肺泡間隔增寬、出血及

4、大量炎性細胞浸潤等急性肺損傷病理改變，預先應用氯沙坦阻斷AngⅡ1型受體ATR1可緩解由AngⅡ所致的肺組織病理損傷。AngⅡ組肺組織NF-κB活性、TNF-α mRNA表達、MPO、MDA及vWF含量均明顯高于對照組(P<0.05)，Ang Ⅱ+氯沙坦組肺組織NF-κB活性、TNF-αmRNA表達、MPO、MDA及vWF含量較AngⅡ組明顯下降，但與對照組和氯沙坦組相比無顯著差異(P>0.05)。Ang Ⅱ組支氣管上皮細胞、肺泡上皮細

5、胞TUNEL陽性細胞數(shù)較對照組明顯增加，AngⅡ+氯沙坦組陽性細胞數(shù)較AngⅡ組明顯下降，但仍顯著高于對照組及氯沙坦組水平(P<0.05)。AngⅡ組ATR1mRNA表達水平明顯高與對照組、AngⅡ+氯沙坦組及氯沙坦組，但對照組、AngⅡ組、AngⅡ+氯沙坦組和氯沙坦組ATR1蛋白表達水平無顯著差異(P>0.05)。 結(jié)論：AngⅡ可激活肺部炎癥反應和細胞凋亡并導致急性肺損傷，AngⅡ在肺部的促炎作用主要是通過其1型受體介導的。

6、 第二部分，目的：探討血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)通過血管緊張素Ⅱ1型受體(ATR1)途徑在介導脂多糖(LPS)誘導的急性肺損傷大鼠肺部炎癥反應中的作用。 方法：清潔級SD大鼠18只，隨機分為：①對照組：靜脈注射與LPS等量的生理鹽水；②ALI組：靜脈注射LPS 10 mg/kg復制ALI模型；③ALI+氯沙坦組：靜脈注射LPS 10 mg/kg前30 min，予以靜脈注射losartan 20 ug/kg并以20 ugk

7、g<'-1>．min<'-1>持續(xù)靜脈泵入。實驗過程中股動脈置管每小時監(jiān)測平均動脈壓(MAP)，LPS注射6h后處死動物。另18只SD大鼠進行LPSR寸血漿及肺組織Ang Ⅱ濃度影響實驗。大鼠隨機分為：LPS 3 h組、LPS 9 h組和LPS 12 h組，分別在LPS注射3、9和12 h后處死。光鏡觀察肺組織病理改變并測定肺組織肺濕/干重比(W/D)。放射免疫分析法測定血漿及肺組織Ang Ⅱ濃度。凝膠遷移率改變電泳法(EMSA)測定肺

8、組織核因子-κB(NF-κB)活性，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測肺組織腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及ATR1 mRNA表達水平，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血漿中血管性血友病因子(vWF)的含量反映內(nèi)皮細胞損傷，比色法測定髓過氧化物酶(MPO)和丙二醛(MDA)含量，TUNEL分析肺組織細胞凋亡情況，Western Blot方法檢測肺組織ATR1蛋白表達水平。 結(jié)果：對照組大鼠實驗過程中MAP維持穩(wěn)定，ALI組

9、及ALI+氯沙坦組大鼠LPS注射后MAP均明顯下降，但相同時間點ALI和ALI+氯沙坦組MAP無明顯差異。ALI組肺組織W/D為(5.02±0.0.18)，明顯高于對照組(3.39±0.32)。應用氯沙坦組預先阻斷ATR1(ALI+氯沙坦組)可使肺組織W/D(4.68±0.60)較ALI組明顯下降，但仍顯著高于對照組水平(P<0.05)。LPS誘導ALI肺組織病理檢查見肺泡萎陷，肺泡間隔增寬，肺泡間質(zhì)內(nèi)大量出血及炎細胞滲出，肺泡間質(zhì)血管

10、充血，應用氯沙坦預先阻斷ATR1受體可使ALI大鼠肺組織病理損傷明顯減輕。LPS注射后，大鼠血漿及肺組織Ang Ⅱ濃度均逐漸升高，9h時達峰值。ALI組肺組織NF-κB活性、TNF-αmRNA表達、MPO、MDA、vWF含量及凋亡指數(shù)均明顯高于對照組，應用氯沙坦組預先阻斷ATR1受體可使ALI大鼠肺組織上述指標明顯下降，但NF-κB活性、MPO含量及凋亡指數(shù)仍明顯高于對照組(P<0.05)。ALI組TUNEL染色見支氣管上皮細胞、肺泡上

11、皮細胞TUNEL陽性細胞較對照組數(shù)明顯增加，ALI+氯沙坦組陽性細胞數(shù)較ALI組明顯下降，但仍顯著高于對照組水平。LPS刺激可導致大鼠肺ATR1 mRNA及蛋白表達水平明顯升高，預先用氯沙坦阻斷ATR1受體可使ATR1 mRNA表達明顯下降(P<0.05)，但對ATR1蛋白表達影響不明顯(P>0.05)。 結(jié)論：LPS誘導ALI時，升高的AngⅡ可通過ATR1途徑加重肺部炎癥反應，損傷血管內(nèi)皮細胞并促進肺組織細胞調(diào)亡，阻斷ATR