硒化殼聚糖對(duì)急性早幼粒細(xì)胞性白血病NB4細(xì)胞的作用及其機(jī)制探討.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、急性早幼粒細(xì)胞性白血病(APL)是急性白血病中的一種特殊類型,約占髓細(xì)胞性白血病的10%。 95%以上的APL具有特征性的t(15:17)染色體異位,即位于15號(hào)染色體上的早幼粒細(xì)胞白血病(PML)基因與位于17號(hào)染色體上的維甲酸受體α(RAR α)基因相互異位,所形成的PML-RARα融合基因表達(dá)的融合蛋白分子量約為110KD,具有一定的酪氨酸激酶活性,增高的酪氨酸激酶活性可使融合蛋白自身及細(xì)胞內(nèi)多種底物分子磷酸化,進(jìn)而募集和結(jié)合許多

2、轉(zhuǎn)接蛋白分子,從而激活許多相關(guān)的細(xì)胞信號(hào)通路,使細(xì)胞異常增殖,在APL的發(fā)病和治療中起著關(guān)鍵作用。故而降低APL細(xì)胞內(nèi)融合蛋白含量,抑制其酪氨酸激酶活性,阻斷其可能的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑已成為當(dāng)前針對(duì)分子靶點(diǎn)進(jìn)行治療的策略。 硒化殼聚糖是將殼聚糖與亞硒酸在酸性條件下,以混合金屬離子為催化劑制備而成的一種低分子量有機(jī)硒,可有效克服無機(jī)硒不易被細(xì)胞吸收,活性和毒性范圍較窄,致死量相對(duì)較小等缺點(diǎn)。硒和砷屬同族,而砷在臨床上早已做為一種抗A

3、PL藥物使用。故硒化殼聚糖也應(yīng)具有抗APL的作用,且毒副作用應(yīng)該比無機(jī)硒和砷小得多。 本課題以表達(dá)PML-RAR α融合蛋白的NB4細(xì)胞為試驗(yàn)對(duì)象,全面觀察硒化殼聚糖對(duì)NB4細(xì)胞增殖、凋亡和分化的影響,以及硒化殼聚糖與常用的化療藥合用對(duì)NB4細(xì)胞作用的特點(diǎn),探索硒化殼聚糖對(duì)NB4細(xì)胞作用的最適濃度及對(duì)融合基因、融合蛋白、細(xì)胞周期蛋白以及相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響等,為硒化殼聚糖的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 研究結(jié)果表明,硒化殼聚糖可

4、明顯升高細(xì)胞內(nèi)GSH-PX活力,降低MDA含量和SOD活性。在本實(shí)驗(yàn)條件下,50mg/L的硒化殼聚糖可誘導(dǎo)NB4細(xì)胞向正常成熟細(xì)胞方向分化,若增加劑量至100mg/L及以上,藥物對(duì)細(xì)胞則主要產(chǎn)生誘導(dǎo)凋亡方面的作用;硒化殼聚糖和亞硒酸鈉對(duì)NB4細(xì)胞都可產(chǎn)生明顯的細(xì)胞毒作用,且呈量效和時(shí)效關(guān)系,它們的IC<,50>分別是103.7mg/L和16.7umol/L,以同等含硒量來比較其效應(yīng),則硒化殼聚糖的作用效果約為亞硒酸鈉的三倍;以激光共聚焦

5、顯微鏡、AO/EB熒光染色法、流式細(xì)胞儀檢測、DNA片段化凝膠電泳測定以及電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察等方法分析表明,硒化殼聚糖可誘導(dǎo)NB4細(xì)胞凋亡,阻斷細(xì)胞于GO/G1期,提示硒化殼聚糖對(duì)APL的治療可能具有一定的價(jià)值。硒化殼聚糖與ADM同時(shí)合用對(duì)NB4細(xì)胞可產(chǎn)生單純相加至增強(qiáng)的協(xié)同殺傷效果,尤其是硒化殼聚糖與低濃度ADM的協(xié)同作用更為顯著。硒化殼聚糖與ADM序貫給藥時(shí)二藥可產(chǎn)生單向協(xié)同,但協(xié)同效果不如同時(shí)合用顯著。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示,1

6、、硒化殼聚糖可明顯減少NB4細(xì)胞內(nèi)PML-RARα融合蛋白含量,呈量效、時(shí)效關(guān)系,但硒化殼聚糖對(duì)PML-RARα融合基因的轉(zhuǎn)錄沒有影響。2、硒化殼聚糖可降低NB4細(xì)胞內(nèi)cyclinD1的表達(dá)。3、硒化殼聚糖可降低NB4細(xì)胞內(nèi)c-jun和MEK-1信號(hào)分子的含量,從而抑制了Ras信號(hào)傳導(dǎo)通路。4、硒化殼聚糖可減少NB4細(xì)胞核內(nèi)NF-KB的含量,從而抑制了NF-KB信號(hào)傳導(dǎo)通路。5、硒化殼聚糖可提高NB4細(xì)胞內(nèi)cAMP含量,降低cGMP的含

7、量,增加cAMP與cGMP的比值。6、硒化殼聚糖可使細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度呈劑量與時(shí)間依賴性提高。7、50mg/L的硒化殼聚糖可增加NB4細(xì)胞膜上CD11b抗原分子的表達(dá)。以上這些作用可能都與硒化殼聚糖能抑制細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,促進(jìn)細(xì)胞分化作用密切相關(guān)。 綜上所述,硒化殼聚糖可能通過減少NB4細(xì)胞內(nèi)PML-RARα融合蛋白和cyclinD1蛋白的含量,抑制細(xì)胞內(nèi)Ras信號(hào)途徑和NF-KB信號(hào)途徑,提高細(xì)胞內(nèi)cAMP含量,降低cGM

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