自身免疫性心肌炎中Th17-Treg細(xì)胞的變化與意義.pdf

1、目的:
　　研究實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎(EAM)疾病過(guò)程中Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt和Foxp3及其相關(guān)細(xì)胞因子IL-17和TGF-β的動(dòng)態(tài)變化,探討Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞及其細(xì)胞因子在EAM進(jìn)展中的作用及意義。
　　方法:
　　采用豬心肌肌球蛋白和完全弗氏佐劑混合乳化液皮下注射Balb/C小鼠方法誘導(dǎo)制備EAM動(dòng)物模型,正常對(duì)照組以PBS代替豬心肌肌球蛋白皮下注射。并按下述方式分組,每組6

2、只。各組于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)眼球采血處死,留取心臟標(biāo)本,HE染色觀察心肌組織病理變化,RT-PCR檢測(cè)心肌RORγt、Foxp3、IL-17和TGF-βmRNA轉(zhuǎn)錄水平,免疫組化檢測(cè)小鼠心肌組織IL-17和Foxp3蛋白水平,ELISA方法檢測(cè)血清IL-17和TGF-β蛋白表達(dá)。分組方式一:先將EAM組和正常對(duì)照組隨機(jī)分成7d、21d、56d3個(gè)不同時(shí)間段亞組;分組方式二:另將EAM組小鼠隨機(jī)分為IL-17單克隆抗體干預(yù)組(IL-17mAb組)

3、、同型對(duì)照組和PBS組,于免疫后第0、1、2d分別尾靜脈注射100ug/0.1ml的IL-17mAb、同型對(duì)照抗小鼠IgG2A或0.1mlPBS。
　　結(jié)果:
　　1.心肌組織病理改變EAM組小鼠7d時(shí)心肌細(xì)胞腫脹,21d可見(jiàn)心外膜下及心肌間質(zhì)出現(xiàn)廣泛炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),肌纖維排列紊亂,伴有心肌壞死區(qū),56d炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少,出現(xiàn)較多纖維增生。與正常對(duì)照組相比,EAM組各時(shí)間點(diǎn)炎癥積分均升高(P<0.05)。IL-17mAb組

4、心肌浸潤(rùn)細(xì)胞明顯減少,心肌病理積分與同型對(duì)照組和PBS組相比顯著減低(P<0.01),但仍高于正常對(duì)照組。同型對(duì)照組和PBS組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),均明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)。
　　2.心肌組織IL-17、Foxp3蛋白表達(dá)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示EAM組心肌組織7d有少量IL-17、Foxp3蛋白表達(dá),21d時(shí)表達(dá)量達(dá)到高峰,56d表達(dá)下降,高于正常對(duì)照組小鼠心肌組織表達(dá)量(P<0.01)。正常對(duì)照組各時(shí)間

5、點(diǎn)比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。IL-17mAb組IL-17和Foxp3蛋白水平明顯降低,低于同型對(duì)照組和PBS組,高于正常對(duì)照組,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。同型對(duì)照組、PBS組IL-17和Foxp3蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯增加,兩組之間比較無(wú)差異(P>0.05)。
　　3.心肌組織RORγt、Foxp3、IL-17和TGF-βmRNA表達(dá)EAM組21d心肌RORγt、Foxp3、IL-17和TGF-βmRNA表達(dá)較正常對(duì)照組

6、明顯升高(P<0.05),7d和56d變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),21d時(shí)各指標(biāo)mRNA升高最為顯著。RORγt、Foxp3、IL-17和TGF-βmRNA轉(zhuǎn)錄水平IL-17mAb組、同型對(duì)照組和PBS組均比對(duì)照組表達(dá)升高(P<0.01),IL-17mAb組與同型對(duì)照組和PBS組相比沒(méi)有差異(P>0.05)。
　　4.血清IL-17和TGF-β水平EAM組21d和56d小鼠血清IL-17和TGF-β蛋白表達(dá)水平較正常對(duì)照組升

7、高(P<0.05),21dIL-17和TGF-β蛋白表達(dá)要顯著高于7d和56d表達(dá)量(P<0.01)。正常對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。IL-17mAb組血清IL-17、TGF-β含量明顯比同型對(duì)照組和PBS組低,與正常對(duì)照組相比處于較高水平。同型對(duì)照組和PBS組IL-17含量顯著高于正常對(duì)照組,兩組比較沒(méi)有差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、注射豬心肌肌球蛋白可成功誘導(dǎo)出小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎。