Neuromedin U2受體的非肽激動(dòng)劑的初步研究.pdf

1、華東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文NeuromedinU2受體的非肽激動(dòng)劑的初步研究姓名：房麗燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生理學(xué)指導(dǎo)教師：胡應(yīng)和20060501華東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要NeuromedinU2受體的非肽激動(dòng)劑的初步研究摘要NeuromedinU2受體(NMU2R)在調(diào)節(jié)攝食和體重方面發(fā)揮著重要作用，因此NMU2R的激動(dòng)劑可能成為抵制肥胖的一種減肥藥，但目前關(guān)于NMU2R的非內(nèi)源性激動(dòng)劑的報(bào)道很少，并且關(guān)于卜琢仉，2R的具體作

2、用機(jī)制還未完全清楚。本文利用NMU2R受體細(xì)胞株研究了NMU2R受體激動(dòng)劑的活性，以及利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)了NMU2R參與調(diào)節(jié)攝食以及胰島素敏感性方面的相關(guān)基因的變化。1NMU2R受體細(xì)胞株的建立本文采用PCR技術(shù)從人基因組DNA中克隆出NMU2R全長(zhǎng)cDNA，然后將其克隆入真核表達(dá)載體pcDNA31()中，構(gòu)建NMU2RpcDNA31真核表達(dá)載體。將NMU2R_pcDNA31載體和報(bào)告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染入HEK293細(xì)胞中，得

3、到穩(wěn)定細(xì)胞株。利用CRE的激活劑ForSkolin和NMU2R的內(nèi)源性激動(dòng)劑NMU檢測(cè)細(xì)胞株的活性，熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)量檢測(cè)結(jié)果顯示該細(xì)胞株對(duì)Forskolin和NMU都有較好的響應(yīng)，呈劑量依賴關(guān)系。2NMu2R受體激動(dòng)劑的活性分析目前我們已經(jīng)篩選出NMU2R的激動(dòng)劑，經(jīng)過結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)它們同屬于一大類化合物——黃酮類化合物。因此利用NMU2R穩(wěn)定細(xì)胞株在體外檢測(cè)這些化合物以及經(jīng)過修飾的化合物的活性，比較其EC50。結(jié)果顯示，化合物Mm

4、l7與化合物Zsg3具有較好的活性，其EC50分別是14012肛M和16248“M，而利用該細(xì)胞株檢測(cè)的NMU2R的內(nèi)源性配體NMU的EC50為6114uM。3EUK20lO對(duì)食欲相關(guān)基因表達(dá)的影響EUK2010是NMU2R的激動(dòng)劑，實(shí)驗(yàn)證明它能夠減輕大鼠或小鼠的體重。為了研究在NMu2R在調(diào)節(jié)體重和飲食方面的相關(guān)分子作用機(jī)制，將NMu2R的激動(dòng)劑EUK20lO灌喂小鼠，實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)其下丘腦以及脂肪組織中與攝食相關(guān)的基因表