大豆異黃酮對心肌梗死后心室重構的影響及其機制研究.pdf

1、病學及實驗室研究顯示，東亞人心血管病的發(fā)病率和死亡率均明顯低于西方人，認為與亞洲人大豆攝入量高有關。大豆異黃酮是大豆的主要有效成分，主要為金雀異黃素和大豆甙元。關于大豆異黃酮對心血管病作用的研究主要集中在其改善動脈粥樣硬化和冠心病進程方面。文獻報道，金雀異黃素具有抗血管重構的作用，也能影響豚鼠離體心肌細胞興奮收縮偶聯(lián)。心室重構在充血性心力衰竭(CHF)的發(fā)展過程中起著非常重要的作用，已成為CHF長期預后的一項重要判斷指標和治療靶點。而大

2、豆異黃酮抗心室重構作用及金雀異黃素對AngII所致體外培養(yǎng)的新生大鼠心肌成纖維細胞增殖、膠原蛋白分泌和心肌細胞活力的影響尚未見報道。 本實驗觀察了大豆異黃酮對慢性心肌梗死大鼠梗死范圍、心室重構、血流動力學的影響；對急性心肌梗死大鼠梗死范圍、血流動力學、血清酶活力及血清丙二醛含量的影響；進一步在體外培養(yǎng)的新生大鼠心肌成纖維細胞和心肌細胞觀察了金雀異黃素對正常及血管緊張素II作用下的心肌成纖維細胞增殖、膠原蛋白分泌和心肌細胞活力的影

3、響。 一．大鼠心肌梗死后給予大豆異黃酮對心室重構的影響 目的：觀察大豆異黃酮對慢性心肌梗死大鼠梗死范圍、心室重構和血流動力學的影響。方法：雄性SD大鼠，結扎冠狀動脈左前降支，造成心肌梗死。實驗分為6組：假手術組，心肌梗死模型組，卡托普利組，大豆異黃酮低、中、高劑量組。在結扎冠狀動脈后3h開始，分別灌胃給予O．5％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，0．5％CMC-Na，卡托普利50mg·kg-1，大豆異黃酮30，90和270

4、mg·kg-1，每天給藥1次，連續(xù)給藥35d。給藥容積均為10mL·kg一。最后一次給藥后24h，經右頸總動脈逆行插管入左心室，記錄左心室內壓圖形，通過SMUP-PC型生物信號處理系統(tǒng)分析測定心率(HR)、左室舒張末期壓(LVEDP)、左室收縮壓峰值(Peak)、左室壓最大上升速率／下降速率(±dp／dtmax)和心肌最大縮短速率(Vmax)。處死大鼠，取心臟，測定全心室重量和體重比(TVW／BW)。制作大鼠心臟切片，用天狼猩紅染色，在

5、圖像分析系統(tǒng)下測量梗死范圍(IS1、左心室內徑(LVD)、室間隔厚度(ST)，心肌間質膠原容積系數(shù)(ICVF)和血管周圍膠原容積系數(shù)(PCVF)。結果：卡托普利組，大豆異黃酮90mg·kg-I和270mg·kg-1組大鼠的梗死范圍分別是(31士s4)％，(32±3)％和(31士5)％，均顯著小于心肌梗死模型組大鼠[(38．9士2．9)％，P<0．01]。心肌梗死模型組大鼠的TVW／BW，LVD，ICVF和PCVF均比假手術組明顯增加(P

6、<0．01)，而ST顯著減小(P<0．01)。增加的TVW／BW，LVD，ICVF和PCVF可由卡托普利，大豆異黃酮90mg·kg-1和270mg·kg'1明顯減少[P<0．01，P<0．05(SI90mg．kg-1組的LVD)。給予卡托普利，大豆異黃酮90mg·kg-I和270mg·kg-1也可增加ST(P<0．01)。結扎LAD后，大鼠的Peak，±ap／atm觚和Vmax明顯降低(P<0．01)，而LVEDP明顯升高(P<0．01

7、)，給予卡托普利，大豆異黃酮90mg·kg-I和270mg·kg-I可升高Peak，±ap／dtm戕和Vmax(P

8、O．5％CMC-Na，0．5％CMC-Na，卡托普利50mg．kg-I，大豆異黃酮30，90和270mg~kg-1，每天給藥1次，連續(xù)給藥8d，給藥容積為10mL．kg-I。最后一次給藥后30min，結扎冠狀動脈左前降支制備心肌梗死模型。冠狀動脈結扎后24h，測定血流動力學參數(shù)方法同上。從大鼠股動脈采血2mL，離心收集血清，用于測定血清肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活力以及血清丙二醛(MDA)含量。

9、處死大鼠，迅速取出心臟，沿冠狀面將心室切成5片，硝基四氮唑蘭(N-BT)染色，測量梗死范圍(IS)。結果：卡托普利組，大豆異黃酮90mg~kg-1和270mg．kg-I組大鼠的梗死范圍分別是(¨．3士1．8)％，(14．1+2．0)％和(¨．94-2．0)％，均顯著小于心肌梗死模型組大鼠[(20．04-2．5)％，P<0．01]。與假手術組比較，心肌梗死模型組大鼠的Peak，+ap／dtmax和Vmax明顯降低(P<0．01)，而LVE

10、DP明顯升高(P<0．01)。預先給予卡托普利，大豆異黃酮90mg·kg-I和270mg·kg-1可使降低的±ap／atmax升高(P

11、0mg·kg-I和270mg·kg-l可使升高的血清CK、LDH活力和MDA含量降低(P<0．01，P<0．05)，降低的血清SOD活力升高(P

12、心肌細胞(CM)。第3-4代CFb和原代CM用于實驗。細胞分成¨組，分別與培養(yǎng)液、DMSO、金雀異黃素(O．1，1，10，1001amol-L'1)、AngII(0.1am01．L1)和AngII(O．1gmol-L1)+金雀異黃素(0．1，1，10,1001am01．L1)共同孵育48小時，通過MTT法測定OD值，計算CFb存活率，評價CM活力；收集成纖維細胞培養(yǎng)上清液，用試劑盒(堿水解法)測定羥脯氨酸含量，計算膠原蛋白的含量。結果：

13、DMSO對CFb存活率、CFb培養(yǎng)上清液中膠原蛋白含量和CM的OD值無明顯影響(P>0．05)。AngII組的CFb存活率、CFb培養(yǎng)上清液中膠原蛋白含量和CM的OD值分別為(142．0-a=5．1)％，(43+3)gg-mL1和0．495~0．033，均顯著高于空白對照組[100％，(24．0-a：1．9)[tg．mL-I和(0．360~0．028)，P<0．01]。與DMSO組相比，金雀異黃素100gm01．L'~組的CFb存活率、

14、CFb培養(yǎng)上清液中膠原蛋白含量和CM的OD值顯著降低(P<0．01)。與AngII組相比，金雀異黃素100gm01．L1與AngIIO．1gm01．L1共同孵育后，CFb存活率、CFb培養(yǎng)上清液中膠原蛋白含量和CM的OD值明顯降低(P<0．01)。 結論：本試驗首次發(fā)現(xiàn)大豆異黃酮90mg·kg-1，270mg·kg'1，每天一次，連續(xù)給藥35天，能夠縮小慢性心肌梗死大鼠的梗死范圍，減輕心室重構，改善心臟的收縮和舒張功能。預先給予

15、大豆異黃酮90mg·kg-1，270mg·kg-1，每天一次，連續(xù)給藥8天，能夠縮小急性心肌梗死大鼠的梗死范圍，降低血清CK和LDH活力和MDA含量，提高血清SOD活力，改善心臟的收縮和舒張功能。在體外培養(yǎng)的新生大鼠心肌成纖維細胞和心肌細胞上，首次發(fā)現(xiàn)，金雀異黃素1001am01．Lq不僅能夠抑制體外培養(yǎng)的正常CFb增殖、膠原蛋白分泌和CM活力，還能抑制由AngIIO．1gm01．L1所引起的體外培養(yǎng)CFb增殖、膠原蛋白分泌和CM活力的