Role of Certain Mitochondrion Enzymes in Cartilages on the Pathogenesis of Osteoarthritis.pdf

1、背景：
　　近年來骨性關(guān)節(jié)炎(OA)已逐漸成為一個威脅公共健康問題。骨性關(guān)節(jié)炎具有明顯的年齡相關(guān)性，40歲以前并不常見，之后隨著年齡增高患病風(fēng)險明顯增加。OA的臨床癥狀主要包括關(guān)節(jié)疼痛、捻發(fā)音、腫脹、僵硬、活動受限、疲勞及功能受限;病理主要表現(xiàn)為基質(zhì)的降解和細(xì)胞的死亡，從而逐漸破壞關(guān)節(jié)軟骨的完整性。人們對骨性關(guān)節(jié)炎的致病因素已經(jīng)經(jīng)過了很長時間的探索，但至今仍不明確。近來有研究顯示線粒體可能在骨性關(guān)節(jié)炎的致病中起到重要的作用。盡管如

2、此，線粒體電子傳遞鏈中的關(guān)鍵酶和胞質(zhì)中某些重要酶的數(shù)量在骨性關(guān)節(jié)炎軟骨中的變化仍不明確。本實驗擬比較骨性關(guān)節(jié)炎患者軟骨與正常軟骨線粒體電子傳遞鏈中的關(guān)鍵酶和胞質(zhì)中一些重要酶的差異，探尋線粒體在骨性關(guān)節(jié)炎致病中的意義。
　　目的：
　　通過比較正常軟骨與骨性關(guān)節(jié)炎軟骨中某些線粒體酶的表達(dá)情況，初步探討正常軟骨與骨性關(guān)節(jié)炎軟骨中線粒體電子傳遞鏈和胞質(zhì)中某些關(guān)鍵酶的表達(dá)差異及其在骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病中的作用。
　　方法：
　

3、　(1)軟骨標(biāo)本的收集
　　共收集16例骨性關(guān)節(jié)炎患者及12例正常人的軟骨。骨性關(guān)節(jié)炎軟骨來自己確診為骨性關(guān)節(jié)炎的患者進(jìn)行關(guān)節(jié)置換術(shù)時切除的軟骨。正常軟骨來自車禍截肢或急性關(guān)節(jié)外傷關(guān)節(jié)軟骨碎片脫落無法重新固定的患者。這些標(biāo)本來自于江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院。本研究方案獲本院倫理委員會批準(zhǔn)，患者簽署知情同意書。
　　(2)組織固定和染色
　　新鮮軟骨用4％福爾馬林固定，用石蠟包埋。蠟塊切成4μm切片，37℃烘箱加熱3小時，然后

4、用二甲苯脫蠟，蘇木精和伊紅染色。染色結(jié)束后顯微鏡下進(jìn)行病理觀察。
　　(3) RQ-PCR
　　軟骨切成小塊之后加液氮研磨，提取RNA后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。RQ-PCR檢測兩組軟骨中NDUFA1、SDHB、Cytb、COX、V-ATPase H、MDH、HADHSC的表達(dá)情況。
　　(4) Western-blot
　　軟骨切成小塊之后加液氮研磨，之后加入RIPA裂解。Western-blot檢測兩組軟骨中NDUFA

5、1、SDHB、Cytb、COX、V-ATPase H、MDH、HADHSC的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　(1)骨性關(guān)節(jié)炎軟骨中出現(xiàn)滑膜細(xì)胞增生，淋巴細(xì)胞浸潤，嚴(yán)重者甚至出現(xiàn)斑片狀鈣化和纖維化。
　　(2) RQ-PCR結(jié)果顯示與正常軟骨相比NDUFA1、COX在骨性關(guān)節(jié)炎軟骨中升高，COX有顯著性差異(P＜0.05)。SDHB、Cytb、V-ATPase H、MDH在骨性關(guān)節(jié)炎軟骨中下降，SDH有顯著性差異(P＜0.0