質粒pSET152對小單孢菌40027菌株產福堤霉素A的影響.pdf

1、小單孢菌(Micromonospora)是一類能產生結構類型多樣的抗生素的稀有放線菌。就小單孢菌近年來所產生的生物活性物質的數(shù)目，小單孢菌已超過鏈霉菌而位居首位。因此，小單孢菌屬作為尋找新抗生素和其它新生物活性物質的一種新菌源受到越來越多的關注和重視，顯示出巨大的研究潛力。
　　 本文以小單孢菌40027原始菌株和小單孢菌40027::pSET152菌株為研究對象，通過比較小單孢菌40027原始菌株和小單孢菌40027::pSE

2、T152菌株在發(fā)酵過程的生物活性與發(fā)酵產物中的生物活性，研究了質粒pSET152所攜帶的外源基因(acc(3)IV)對小單孢菌40027菌株所產生的次級代謝產物-福堤霉素A的產量、結構、功能之間的影響。
　　 采用超聲波細胞破碎法和反復凍融法對小單孢菌40027菌株的菌絲體進行破碎，研究表明超聲波細胞破碎法破碎小單孢菌40027菌株的菌絲體效果比反復凍融法好，且經驗證小單孢菌40027菌株菌絲體內所產生的少量的抗菌活性物質包含有

3、福堤霉素A，但是胞外所產的生物活性物質要高于胞內。
　　 通過對小單孢菌40027菌株發(fā)酵工藝的研究，結果表明二級種子液制備至12h和發(fā)酵液制備至42h時，這2個時間分別為小單孢菌40027菌株種子培養(yǎng)期及發(fā)酵培養(yǎng)期的最佳時間。
　　 比較小單孢菌40027原始菌株和小單孢菌40027::pSET152菌株在相同培養(yǎng)時期的抑菌活性，研究發(fā)現(xiàn)在菌種活化時期、發(fā)酵培養(yǎng)時期，小單孢菌40027 菌株抑菌活性比小單孢菌40027

4、::pSET 152的抑菌活性強。
　　 對小單孢菌40027菌株的發(fā)酵液分離純化工藝進行研究，結果表明：小單孢菌40027菌株發(fā)酵所產福堤霉素A的飽和吸附量為6倍樹脂體積，0.5N的氨水洗脫液的用量為3倍樹脂體積。提取的粗產物采用TCL檢測，確定了氯仿-甲醇-濃氨水為1:2:1是小單孢菌40027菌株發(fā)酵產物的粗提物薄層層析的最佳展層系統(tǒng)。
　　 對1mg/mL福堤霉素A標準品進行色譜分析，采用示差折光檢測器和蒸發(fā)光散

5、射檢測器進行檢測，表明了蒸發(fā)光散射檢測器檢測福堤霉素A的效果要優(yōu)于前者的檢測效果，且確定蒸發(fā)光散射檢測器的檢測條件為：0.2 mol/L三氟乙酸溶液與甲醇比例為95：5；流速為1.0mL/min；漂移管溫度為40℃；進樣量為20μL；霧化氣體壓力為350kPa。在此條件下1mg/mL福堤霉素A標準品保留時間是7.20min。
　　 對小單孢菌40027::pSET152菌株和小單孢菌40027菌株的發(fā)酵純化產物經高效液相色譜分離

6、，確定了小單孢菌40027::pSET152菌株和小單孢菌40027菌株的發(fā)酵所產福堤霉素A的保留時間分別為7.31、7.35 min，峰面積所占比例分別為11.9[％]、12.3[％]，表明了二者發(fā)酵產物中含有基本等量的福堤霉素A。結果暗示了二者之間抑菌活性的差別不是由于二者所產的福堤霉素A的含量不同造成的，而是由于質粒pSET152所包含的acc(3)IV對福堤霉素A的結構有不同程度的鈍化，引起福堤霉素A結構變化，從而導致了福堤霉素