疾病蛋白標(biāo)志物與基因突變檢測(cè)電學(xué)式生物傳感器新方法研究.pdf

1、隨著生物傳感器在環(huán)境、食品、醫(yī)藥和軍事等方面應(yīng)用范圍的擴(kuò)大，因而吸引了眾多研究者的興趣。為了獲得高靈敏度、薦生性好、低成本的生物傳感器，我們對(duì)此做了相關(guān)研究。本論文主要基于電化學(xué)和壓電晶振技術(shù)，設(shè)計(jì)建立了幾種新型生物傳感器技術(shù)，實(shí)現(xiàn)腫瘤及遺傳病的準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)。主要內(nèi)容如下： (1)報(bào)道了一種新型的基于壓電免疫凝集的腫瘤標(biāo)志物——人血清甲胎蛋白(AFP)的快速傳感技術(shù)。此方法的基本原理是表面修飾了兔抗AFP多克隆抗體的納

2、米脂質(zhì)體可與多價(jià)抗原AFP發(fā)生特異性免疫識(shí)別，誘導(dǎo)免疫脂質(zhì)體產(chǎn)生特異性凝集反應(yīng)，并引起溶液粘度變化，該粘度變化可采用壓電傳感器的響應(yīng)頻率變化而進(jìn)行監(jiān)測(cè)。為了消除干擾蛋白質(zhì)成份的非特異性吸附，可用牛血清白蛋白(BSA)修飾壓電傳感器表面，并在分析介質(zhì)中引入高濃度BSA以降低背景干擾。我們考察脂質(zhì)體的組成，分析介質(zhì)中脂質(zhì)體濃度與聚乙二醇(PEG)濃度等的影響。結(jié)果表明，當(dāng)人血清AFP的濃度在0.06-5μg mL-1時(shí)，該壓電免疫傳感器的頻

3、移與AFP的濃度成線性關(guān)系，檢測(cè)下限為60ng mL-1。 (2)提出了一種新型基于脂質(zhì)體界面凝集、對(duì)霍亂毒素的快速檢測(cè)壓電生物傳感器。我們首先在金電極表面修飾一層長(zhǎng)鏈烷烴硫醇，然后在表面鋪展飾有神經(jīng)節(jié)菅脂的支撐磷脂膜。當(dāng)存在霍亂毒素時(shí)，霍亂毒素會(huì)被晶振表面的神經(jīng)節(jié)苷脂捕獲和溶液中磷脂液泡的神經(jīng)節(jié)苷脂捕獲，從而產(chǎn)生特異性凝集反應(yīng)。這樣溶液的密度和粘度變化，而且會(huì)增強(qiáng)石英晶振表面質(zhì)量響應(yīng)變化，最終石英晶振的響應(yīng)頻率會(huì)大幅降低。除了

4、通過(guò)響應(yīng)頻率來(lái)量化霍亂毒素，我們也可以通過(guò)初始階段的響應(yīng)頻率速度(△F/△S)來(lái)檢測(cè)霍亂毒素。螭應(yīng)頻率速度在快速檢測(cè)實(shí)驗(yàn)有著特殊的意義。該方法對(duì)霍亂毒素的檢測(cè)范圍是0.1-5μg mL-1，檢測(cè)下限為25ng mL-1。支撐磷脂膜不但對(duì)人血清蛋白沒(méi)有吸附，而且能夠迅速再生。 (3)MutS蛋白是DNA修復(fù)系統(tǒng)中的一個(gè)重要部分，它能夠準(zhǔn)確的識(shí)別并結(jié)合所有的單堿基錯(cuò)配，以及1-4堿基插入和缺失形成的不依賴于其它蛋白質(zhì)或輔助因子的各種