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文檔簡介
1、基于生物質(zhì)譜技術(shù)(如基質(zhì)輔助激光解吸飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜:MALDI-TOF-TOF)的蛋白質(zhì)相對定量和定性已成為蛋白質(zhì)研究最重要的兩大任務(wù)。本論文工作針對SPITC標記能夠有效提高多肽的梯度測序效率的特點,以及18O標記可以方便快速獲得定量信息的優(yōu)點,將兩者有機結(jié)合完成了對多肽同時定性定量的測定。傳統(tǒng)的方法在一級質(zhì)譜獲取定量信息,在二級質(zhì)譜中獲取定性信息,而本研究提出的新方法則在二級質(zhì)譜中即可同時得到定量和定性信息。實驗對比發(fā)現(xiàn)新方法與傳
2、統(tǒng)方法得到的數(shù)據(jù)一致,因而只需一份二級質(zhì)譜圖就能很好的詮釋樣品的定量和定性信息。該SPITC結(jié)合18O標記進行的蛋白質(zhì)定量和定性的方法學在基因組未知的穴居狼蛛(Lycosasingoriensis)的粗毒中進行了驗證,結(jié)果表明該方法在復(fù)雜樣品中也能準確的完成定量和定性,由此得到的定性信息對后續(xù)的蜘蛛毒素或者其它的基因組未知樣品的功能深入研究有重要指導(dǎo)意義。
在常用的同位素標記中,18O同位素因其無污染、無需額外處理且效率高而備
3、受親睞,但是在長期實驗中發(fā)現(xiàn)18O同位素標記其存在“自然同位素峰干擾”和“18O原子回交”兩大缺點。自然同位素干擾無法消除,只能選擇性回避,這會導(dǎo)致大量蛋白質(zhì)得不到精確定量;18O原子回交是原子的自發(fā)運動,只能通過縮短標記和質(zhì)譜鑒定這兩步的時間間隔、調(diào)節(jié)pH和溫度等方法來降低回交速度,但無法完全杜絕。本研究一改“以堵治水”的思路,與其竭力研究如何杜絕這兩個因素的影響,不如弄清是如何影響且影響的程度,因此針對這兩個影響定量的因素設(shè)計了修正
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