二級質譜同時定量定性及18O定量修正公式的設計和驗證.pdf

1、基于生物質譜技術(如基質輔助激光解吸飛行時間串聯質譜:MALDI-TOF-TOF)的蛋白質相對定量和定性已成為蛋白質研究最重要的兩大任務。本論文工作針對SPITC標記能夠有效提高多肽的梯度測序效率的特點，以及18O標記可以方便快速獲得定量信息的優(yōu)點，將兩者有機結合完成了對多肽同時定性定量的測定。傳統(tǒng)的方法在一級質譜獲取定量信息，在二級質譜中獲取定性信息，而本研究提出的新方法則在二級質譜中即可同時得到定量和定性信息。實驗對比發(fā)現新方法與傳

2、統(tǒng)方法得到的數據一致，因而只需一份二級質譜圖就能很好的詮釋樣品的定量和定性信息。該SPITC結合18O標記進行的蛋白質定量和定性的方法學在基因組未知的穴居狼蛛（Lycosasingoriensis）的粗毒中進行了驗證，結果表明該方法在復雜樣品中也能準確的完成定量和定性，由此得到的定性信息對后續(xù)的蜘蛛毒素或者其它的基因組未知樣品的功能深入研究有重要指導意義。
　　在常用的同位素標記中，18O同位素因其無污染、無需額外處理且效率高而備

3、受親睞，但是在長期實驗中發(fā)現18O同位素標記其存在“自然同位素峰干擾”和“18O原子回交”兩大缺點。自然同位素干擾無法消除，只能選擇性回避，這會導致大量蛋白質得不到精確定量;18O原子回交是原子的自發(fā)運動，只能通過縮短標記和質譜鑒定這兩步的時間間隔、調節(jié)pH和溫度等方法來降低回交速度，但無法完全杜絕。本研究一改“以堵治水”的思路，與其竭力研究如何杜絕這兩個因素的影響，不如弄清是如何影響且影響的程度，因此針對這兩個影響定量的因素設計了修正