二級(jí)質(zhì)譜同時(shí)定量定性及18O定量修正公式的設(shè)計(jì)和驗(yàn)證.pdf

1、基于生物質(zhì)譜技術(shù)(如基質(zhì)輔助激光解吸飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜:MALDI-TOF-TOF)的蛋白質(zhì)相對(duì)定量和定性已成為蛋白質(zhì)研究最重要的兩大任務(wù)。本論文工作針對(duì)SPITC標(biāo)記能夠有效提高多肽的梯度測(cè)序效率的特點(diǎn)，以及18O標(biāo)記可以方便快速獲得定量信息的優(yōu)點(diǎn)，將兩者有機(jī)結(jié)合完成了對(duì)多肽同時(shí)定性定量的測(cè)定。傳統(tǒng)的方法在一級(jí)質(zhì)譜獲取定量信息，在二級(jí)質(zhì)譜中獲取定性信息，而本研究提出的新方法則在二級(jí)質(zhì)譜中即可同時(shí)得到定量和定性信息。實(shí)驗(yàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn)新方法與傳

2、統(tǒng)方法得到的數(shù)據(jù)一致，因而只需一份二級(jí)質(zhì)譜圖就能很好的詮釋樣品的定量和定性信息。該SPITC結(jié)合18O標(biāo)記進(jìn)行的蛋白質(zhì)定量和定性的方法學(xué)在基因組未知的穴居狼蛛（Lycosasingoriensis）的粗毒中進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果表明該方法在復(fù)雜樣品中也能準(zhǔn)確的完成定量和定性，由此得到的定性信息對(duì)后續(xù)的蜘蛛毒素或者其它的基因組未知樣品的功能深入研究有重要指導(dǎo)意義。
　　在常用的同位素標(biāo)記中，18O同位素因其無污染、無需額外處理且效率高而備

3、受親睞，但是在長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)18O同位素標(biāo)記其存在“自然同位素峰干擾”和“18O原子回交”兩大缺點(diǎn)。自然同位素干擾無法消除，只能選擇性回避，這會(huì)導(dǎo)致大量蛋白質(zhì)得不到精確定量;18O原子回交是原子的自發(fā)運(yùn)動(dòng)，只能通過縮短標(biāo)記和質(zhì)譜鑒定這兩步的時(shí)間間隔、調(diào)節(jié)pH和溫度等方法來降低回交速度，但無法完全杜絕。本研究一改“以堵治水”的思路，與其竭力研究如何杜絕這兩個(gè)因素的影響，不如弄清是如何影響且影響的程度，因此針對(duì)這兩個(gè)影響定量的因素設(shè)計(jì)了修正