牛初乳中免疫球蛋白A的分離純化.pdf

1、牛初乳中含有比常乳高10～100倍的IgG、sIgA和IgM。其中的sIgA與母乳中的sIgA具有免疫同源性，具有抗菌、抗炎和抗病毒等生物活性功能，因此開發(fā)利用牛初乳中的sIgA具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　 離心脫脂后得到的牛初乳乳清經(jīng)過(guò)40％的硫酸銨沉淀，獲得的鹽析產(chǎn)品主要含有三種免疫球蛋白，分別是IgG、sIgA和IgM。本文主要研究了從此鹽析樣品中分離純化得到免疫球蛋白A的方法與工藝。包括陰離子交換柱層析分離獲得免疫球蛋

2、白A和免疫球蛋白M(sIgA+IgM)粗產(chǎn)品，凝膠柱層析進(jìn)一步分離獲得免疫球蛋白A這兩個(gè)主要過(guò)程。
　　 經(jīng)脫脂、鹽析后得到的牛初乳原料樣品中主要含有IgG、sIgA和IgM，其中IgG的含量約為81～84%，sIgA+IgM的含量約為16-19%。首先，以陰離子交換柱層析對(duì)三種免疫球蛋白進(jìn)行初步分離，除去大部分的免疫球蛋白G，獲得sIgA+IgM的粗產(chǎn)品（含有少量IgG）。利用穿透曲線實(shí)驗(yàn)考察了DEAE-650M陰離子交換吸附

3、劑對(duì)不同的免疫球蛋白分離純化的能力，并討論了緩沖液pH和離子強(qiáng)度對(duì)其分離純化能力的影響。在40.2mL的DEAE-650M陰離子交換層析柱中，當(dāng)上樣濃度為50mg/mL，上樣量為1.24mg/mLDEAE-650M陰離子交換介質(zhì)，磷酸鹽緩沖液離子強(qiáng)度為0.15M，pH為7.3時(shí)，免疫球蛋白的分離效果最好，在此條件下通過(guò)層析實(shí)驗(yàn)可獲得純度為56.69%的sIgA+IgM粗產(chǎn)品，而且不同的免疫球蛋白在DEAE-650M陰離子交換介質(zhì)中的動(dòng)態(tài)

4、吸附量隨著緩沖液離子強(qiáng)度的增大而減小。通過(guò)層析實(shí)驗(yàn)，考察了強(qiáng)堿3＃樹脂對(duì)不同的免疫球蛋白分離純化的能力，并討論了不同緩沖液體系及緩沖液的pH和離子強(qiáng)度對(duì)其分離能力的影響。在32.8mL的強(qiáng)堿3＃樹脂層析柱中，當(dāng)上樣量為1.52mg/mL強(qiáng)堿3＃樹脂，上樣濃度為50mg/mL時(shí)，免疫球蛋白在磷酸鹽緩沖液中的分離效果要優(yōu)于tris-HC1緩沖液中的分離效果。優(yōu)化后的工藝條件為離子強(qiáng)度0.03M，pH7.0的磷酸鹽緩沖液，在此條件下可獲得純度

5、為91.24%，回收率為47.00%的sIgA+IgM粗產(chǎn)品。
　　 將在最優(yōu)條件下，從強(qiáng)堿3＃樹脂層析柱中分離獲得的sIgA+IgM粗產(chǎn)品溶液在去離子水中透析脫鹽后，冷凍干燥，平均1mL sIgA+IgM粗產(chǎn)品溶液可獲得0.0010g粉末樣品。將凍干后的粉末樣品用0.03M，pH7.0的磷酸鹽緩沖液重新溶解，配制成濃度為10mg/mL的上樣溶液，在36.8mL的HW-55F凝膠層析柱中，上樣量為1.35mg/mLHW-55F凝