動(dòng)態(tài)高壓微射流技術(shù)對(duì)脂肪酶活性與構(gòu)象的影響.pdf

1、脂肪酶因其廣泛的應(yīng)用而越來(lái)越受關(guān)注,其活性和穩(wěn)定性的變化也是研究的熱點(diǎn)。而動(dòng)態(tài)高壓微射流技術(shù)作為一種處理方法應(yīng)用于脂肪酶還鮮少研究。本課題通過(guò)測(cè)定酶活、圓二色譜、紫外吸收光譜和巰基總量來(lái)研究動(dòng)態(tài)高壓微射流技術(shù)對(duì)脂肪酶活性和構(gòu)象的影響,并協(xié)同研究加入聚合物PEG和有機(jī)溶劑異丙醇化學(xué)修飾對(duì)脂肪酶的影響,探討脂肪酶活性與構(gòu)象之間存在的關(guān)聯(lián)性。并首次嘗試將DHPM處理應(yīng)用于酶非水相催化之中。
　　 以CRL為原料,研究DHPM處理對(duì)其活

2、性及構(gòu)象的影響。發(fā)現(xiàn):DHPM50MPa和100MPa處理對(duì)CRL相對(duì)活性沒(méi)有顯著影響,150MPa和200MPa處理下CRL活性升高,最高增加11.33％左右。而隨著貯存時(shí)間的增加相對(duì)活性先升高后降低,在貯存1h后,活性達(dá)到最高。經(jīng)過(guò)8h后,處理酶均處于鈍化狀態(tài)。DHPM處理對(duì)CRL二級(jí)結(jié)構(gòu)有影響。β-折疊的含量變化趨勢(shì)與CRL的相對(duì)酶活的變化趨勢(shì)相似,兩者變化呈一定的正相關(guān),而α-螺旋的變化呈現(xiàn)非線性變化。DHPM處理使CRL的酶結(jié)

3、構(gòu)部分舒展,三維結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化。
　　 通過(guò)DHPM協(xié)同化學(xué)修飾處理CRL,研究其活性和構(gòu)象的變化。在CRL緩沖體系中加入聚乙二醇,再經(jīng)DHPM處理。結(jié)果顯示:在PEG80004％(w／v)時(shí),CRL的相對(duì)活性達(dá)到105.1％。DHPM處理加入4％(w／v)PEG8000的CRL后,發(fā)現(xiàn)其相對(duì)活性降低,而隨著貯存時(shí)間的增長(zhǎng),CRL的酶活均有所提高。對(duì)CRL而言最佳中間態(tài)是100MPa處理下反應(yīng)6h(激活43.73％)。聚合物PE

4、G對(duì)CRL Tm值影響不顯著,而PEG的加入導(dǎo)致紫外吸收強(qiáng)度發(fā)生變化。在CRL,緩沖體系中加入有機(jī)溶劑異丙醇,再經(jīng)DHPM處理。結(jié)果顯示:異丙醇在20％(v／v)左右的時(shí)候,CRL的相對(duì)活性最高。隨著DHPM處理壓力從100MPa增加到200MPa,CRL的活性逐漸增加。200MPa下處理2次,酶活增加將近20％。而這兩種體系中,CRLβ-折疊含量與酶活變化仍存在一定的正相關(guān)性。
　　 因脂肪酶在非水相催化中的廣泛應(yīng)用,所以提高

5、脂肪酶在非水相中的活性,溶解性和穩(wěn)定性就顯得至關(guān)重要。DHPM處理正己烷體系中的CRL,結(jié)果表明:CRL對(duì)油酸和月桂醇的催化合成率較高。DHPM處理后,CRL的相對(duì)酯化活性發(fā)生改變。隨著處理壓力的增加,相對(duì)酯化活性先升高后降低,在150MPa下達(dá)到最大為103.7％。經(jīng)DHPM處理后的CRL,在正己烷中的溶解性均增加,在150MPa下,其相對(duì)溶解性增加最大,約為16.4％。經(jīng)DHPM處理后的CRL在正己烷中的穩(wěn)定性有所差異；雖然DHPM