小鼠T-bet啟動子熒光素酶報告基因載體的構建及其轉錄因子的篩選.pdf

1、轉錄因子T-bet(T-box expressed in T cells)是T-box基因家族的新型轉錄因子,含530個氨基酸,其中有一個189個氨基酸組成的能與T盒DNA結合的結構域。人與小鼠的TBX21基因(編碼T-bet)具有88％的同源性。T-bet在原初 T細胞向Th1方向分化時具有重要的作用。T-bet作為Th1細胞的譜系限定轉錄因子,對于Th1細胞的分化及穩(wěn)定起了非常重要的作用。同時T-bet又能通過抑制其他細胞亞型的細胞

2、因子的表達從而抑制其分化。Th1細胞也稱為炎癥性 T細胞,介導并參與細胞內病毒和局部炎癥有關的免疫應答,參與細胞免疫及遲發(fā)型超敏性炎癥的形成,目前報道與多種自身免疫疾病相關,尤其與人類的自身免疫病多發(fā)性硬化癥有關。本文主要通過小鼠T-bet啟動子熒光素酶報告基因載體的構建和對 T-bet轉錄因子的篩選,為了解 T-bet在其引起Th1等輔助T細胞介導的自身免疫疾病中的信號轉導及轉錄調控機制,并研究其在多發(fā)性硬化癥中的信號通路提供了方向。

3、研究結果如下:
　　1.本研究構建了小鼠 T-bet基因啟動子區(qū)和非編碼保守序列(No-coding conserved sequence, CNS)螢火蟲熒光素酶報告基因載體,與轉染空質粒pGL4.10組相比,293T細胞(P=0.0122)和Jurkat細胞(P=0.0022)中轉染 pGL4.10-TBX21pr-CNS組熒光素酶活性升高。研究結果表明在293T細胞和Jurkat細胞中pGL4.10-TBX21pr-CNS可

4、以表現(xiàn)出啟動子活性。
　　2.用人的848個轉錄因子表達質粒pLenti6.2/V5-DEST-TFs與T-bet啟動子熒光素酶重組質粒共轉染293T細胞,篩選到可能調控 T-bet轉錄的轉錄因子有16個。其中EBF、PJA1、CEBPE、SSX2特異與CNS作用影響T-bet的轉錄。
　　有報道EBF敲除的淋巴細胞中GATA3的表達上調,然而EBF是通過何種方式下調GATA3的表達并不清楚。此外,有報道稱而GATA3與T-