對(duì)小地老虎有殺蟲活性的Bt菌株特性的研究.pdf

1、蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,簡(jiǎn)稱Bt)為革蘭氏陽(yáng)性菌,由于它可在不同生長(zhǎng)時(shí)期分泌和形成高效殺蟲蛋白,包括營(yíng)養(yǎng)期分泌的殺蟲蛋白(Vips),以及在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期即芽胞形成的同時(shí),形成由cry基因編碼的殺蟲晶體蛋白(ICPs),使其成為了一種殺蟲效果好、安全的殺蟲微生物,并且已在微生物殺蟲劑、轉(zhuǎn)基因等方面得到了廣泛的應(yīng)用。
　　 為能獲得對(duì)小地老虎(Agrotisypsilon)有高致死活性的蘇云金芽胞

2、桿菌,并為微生物殺蟲劑提供良好的材料,本研究以標(biāo)準(zhǔn)菌株庫(kù)斯塔克亞種(B.thuringiensis subsp.kurstaki)HD-1為對(duì)照菌株,以及4株對(duì)小地老虎有高生測(cè)致死活性的候選菌株P(guān)S9-D12、PS9-C12、PS9-D11、PS9-H9共5株Bt菌,分別對(duì)比分析了菌株生長(zhǎng)情況、基因類型、蛋白表達(dá)類型、以及生物活性。
　　 通過對(duì)菌株的生長(zhǎng)情況的對(duì)比,菌株生長(zhǎng)曲線顯示,菌株P(guān)S9-H9與HD-1有較高且相似的生長(zhǎng)

3、速度和生物產(chǎn)量,而PS9-D12的最低；分別通過PCR-RFLP和基因測(cè)序比對(duì)對(duì)菌株含有的基因類型進(jìn)行分析,結(jié)果PS9-D12、PS9-C12含有的基因類型豐富,包括crylA／crylI,cry2A、vip2A和vip3A,同時(shí)獲得3個(gè)新基因:crylAa17、crylAa18、cry2Ab17；菌株蛋白經(jīng)MALDI-TOF-MS分析,PS9-D12、PS9-C12均檢測(cè)到殺蟲蛋白CrylAa、CrylAc、Cry2Ab,菌株P(guān)S9-

4、H9僅檢測(cè)到CrylAc的表達(dá),并發(fā)現(xiàn)PS9-D12、PS9-C12中可能含有其他新基因。
　　 分別制備不同生測(cè)樣品測(cè)定對(duì)小地老虎的毒力,使用菌株HD—1、PS9-D12、PS9-C12、PS9-D11、PS9-H9的胞晶混合凍干粉(mg.g-1)LC50為:0.71、0.19、0.14、0.24、1.16,芽胞凍干粉(mg.g-1)LC50為:4.21、2.55、2.99、4.03、6.55,生測(cè)數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS軟件分析,菌株

5、PS9-D12、PS9-C12的胞晶混合凍干粉與其他菌株生測(cè)樣品的生測(cè)結(jié)果差異極顯著(P<0.05),說明菌株P(guān)S9-D12、PS9-C12相對(duì)于HD-1有很好的生測(cè)活性:另外對(duì)初孵甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、2齡小菜蛾(Plutella xylostella)進(jìn)行生測(cè),結(jié)果菌株P(guān)S9-D12、PS9-C12同樣具有很好的殺蟲活性,但是對(duì)2齡大猿葉甲(Colaphellusbowringi)無(wú)活性。
　　 最