Treg細胞在小鼠過敏性哮喘中作用機制的研究.pdf

1、目的：過敏性支氣管哮喘是一種以T淋巴細胞、嗜酸性粒細胞和肥大細胞等多種炎癥細胞和一系列細胞因子參與的,以氣道慢性炎癥為特征的疾病,目前我國哮喘患病率約為1％,兒童可高達3%,且呈上升趨勢,該病的確切發(fā)病機制仍不十分清楚。大量的研究表明,過敏性哮喘患者體內(nèi)存在Th1細胞與Th2細胞的比例失衡,即過敏性哮喘是Th2細胞過度分化導致的過敏性疾病,然而,也有研究發(fā)現(xiàn),與Th1細胞相關(guān)的炎癥反應并不能減弱支氣管哮喘的發(fā)病,傳統(tǒng)的Th1/Th2比例

2、失衡理論并不能完全解釋過敏性支氣管哮喘的發(fā)病機制。近幾年的研究發(fā)現(xiàn),CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cell,Treg)是機體內(nèi)重要的內(nèi)源性調(diào)節(jié)呼吸道炎癥過程的細胞,并可能在過敏性哮喘的發(fā)病和發(fā)展機制中起到關(guān)鍵性的作用;Treg細胞在體內(nèi)的重要作用是免疫無能性和免疫抑制性,它可以調(diào)節(jié)機體對非病原體抗原如過敏原的耐受性,并參與調(diào)節(jié)抗原引起的免疫炎癥反應;Treg細胞可能與過敏性哮喘的發(fā)生與進展都有密切的關(guān)系,有研

3、究發(fā)現(xiàn),在過敏性哮喘患者的外周血中,Treg細胞的數(shù)量及功能均有不同程度的降低,但Treg細胞作用的具體機制目前還不完全清楚;轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、白細胞介素-10(IL-10)和白細胞介素-35(IL-35)是由CD4+CD25+Treg細胞分泌的,具有抑制免疫應答作用的細胞因子,它們可能是Treg細胞發(fā)揮免疫負調(diào)節(jié)作用的重要介質(zhì)。
　　 方法：⑴將小鼠隨機分為對照組和模型組,模型組小鼠復制哮喘模型。⑵觀察兩組小鼠被

4、OVA或生理鹽水激發(fā)時的表現(xiàn),取肺組織做病理HE染色,用全身體積描計儀(WBP)檢測小鼠氣道反應性,并檢測支氣管肺泡灌沈液沉淀中嗜酸性粒細胞百分比,用上述檢測結(jié)果來判定模型復制是否成功,模型復制成功后用于后續(xù)實驗。⑶對照組和模型組小鼠行支氣管肺泡灌洗,灌洗液離心后用ELISA方法檢測上清中OVA特異的IgE、IL-4、IL-10、IL-35和TGF-β1等細胞因子的水平。⑷分離小鼠血液和脾臟中單個核細胞層,用流式細胞儀檢測CD4+CD2

5、5highTreg細胞占CD4+T細胞的百分比,并應用ELISA方法檢測小鼠血清中OVA特異的IgE、IL-4、IL-10、IL-35和TGF-β1等細胞因子的水平。⑸提取兩組小鼠肺組織的RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,利用SYBR Green I熒光定量PCR的方法檢測每個標本中EBI3、P35、IL-10和Foxp3基因的相對表達水平。⑹應用SPSS17.0進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析;采用GraphPad Prism5進行各種統(tǒng)計圖的制作;SY

6、BR Green I熒光定量PCR數(shù)據(jù)采用2-△△Ct法分析基因mRNA的相對表達量。
　　 結(jié)果：①成功復制了小鼠過敏性哮喘模型。②與對照組相比,哮喘模型組小鼠支氣管肺泡灌洗液沉淀中嗜酸性粒細胞百分比顯著增加(P＜0.05);支氣管肺泡灌洗液和血清中OVA特異的IgE和IL-4水平明顯提高(P＜0.05),IL-10、IL-35和TGF-β1水平顯著降低(P＜0.05)。③與對照組相比,哮喘模型組小鼠血液和脾臟中CD4+CD2

7、5highTreg細胞占CD4+T細胞的百分比顯著下降(P＜0.05)。④與對照組相比,哮喘模型組小鼠肺組織中EB13和P35 mRNA的相對表達量有所下降但不明顯,而IL-10和Foxp3 mRNA的相對表達水平明顯下降。
　　 結(jié)論：本次試驗的研究結(jié)果提示:Treg細胞可能和過敏性哮喘有密切的關(guān)系,Treg細胞數(shù)量的減少或其分泌的抑制性細胞因子水平的降低可能在過敏性哮喘的發(fā)病過程中起關(guān)鍵性的作用,Treg細胞可能是治療過敏性