豆粕發(fā)酵產抗菌肽類活性物質的研究.pdf

1、抗菌肽作為一種具有廣譜抗菌活性的多肽，對細菌、真菌、原生動物、腫瘤細胞、病毒等均有明顯的抑制作用，有望替代抗生素成為新一代的抗菌活性物質。為了研究芽孢桿菌發(fā)酵豆粕產抗菌肽類活性物質的情況，本文從抗菌譜研究、抗菌活性成分確定、多肽粗提取、抗菌肽分離純化、抗菌肽分子量測定等方面進行了深入研究。主要研究內容與結果如下：
　?。?）經抗菌活性研究及菌種鑒定，初步確定能夠產抗菌活性物質的菌株KN-BL-1和KN-BS分別是解淀粉芽孢桿菌（B

2、acillus amyloliquefaciens）和甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌（Bacillus methylotrophicus）。其抗菌譜研究表明，KN-BL-1和KN-BS的營養(yǎng)肉湯發(fā)酵液、液態(tài)豆粕發(fā)酵液和固態(tài)豆粕發(fā)酵的浸提液均對S.aureus，Micrococcus tetragenus，Microbacterium sp.（B009），Brevibacterium sp.（B021）等革蘭氏陽性菌有明顯的抑菌效果，形成的抑菌圈直徑

3、最大達22.5mm。
　?。?）通過酸沉淀法將KN-BL-1和KN-BS的發(fā)酵液和浸提液分成多肽粗提物和上清液兩部分，并通過抗菌活性研究確定其抗菌活性成分均為多肽類物質。這些多肽粗提物對S.aureus有較明顯的抑制作用，形成的抑菌圈直徑最大達18.6mm，而且抑菌圈直徑的大小與多肽粗提物溶液中多肽含量的相關系數(shù)均大于0.99，即多肽含量越高，抑菌圈直徑越大。
　?。?）KN-BL-1和KN-BS的發(fā)酵液和浸提液中的多肽粗提

4、物經DEAE-Sepharose離子交換層析得到的部分層析峰樣品對 S.aureus有明顯抑菌效果，形成的最大抑菌圈直徑達23.8mm。
　?。?）經離子交換層析得到的具有抗菌活性的峰樣品分別進行Sephadex G-25凝膠過濾層析，得到五個抗菌肽組分：LB2-③、SM2-⑤、SM0.2-1-②、BS-LM0.2-3-②和BS-SM2-④。它們對S.aureus均產生明顯的抑菌效果，其中，SM2-⑤和BS-SM2-④形成的抑菌圈