轉(zhuǎn)基因創(chuàng)建矮牽牛、煙草早花種質(zhì)資源的研究.pdf

1、當前,植物花發(fā)育機制已成為植物分子生物學研究的熱點之一。煙草、矮牽牛作為研究花發(fā)育的模式植物,同時矮牽牛又是一種在園林中廣泛應用的花卉植物,對其開花轉(zhuǎn)換的研究以及通過轉(zhuǎn)基因獲得變異植株,無論對植物花發(fā)育機制研究還是植物育種均具有重要的意義。本試驗選用野生型矮牽牛、煙草及其不同轉(zhuǎn)基因突變株系為材料,以葉盤為外植體,將NT、PaFT基因通過根癌農(nóng)桿菌EHA105介導,進行遺傳轉(zhuǎn)化,獲得轉(zhuǎn)基因植株,并從形態(tài)、解剖和分子等水平,分析它們的異源表

2、達對轉(zhuǎn)基因植物生長發(fā)育的影響,為NT、PaFT基因功能及后期的調(diào)控機理研究奠定基礎,同時創(chuàng)造更多新的早花煙草、矮牽牛種質(zhì)資源。主要結(jié)果如下:
　　 1.通過農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化獲得花期顯著提前的NT轉(zhuǎn)基因煙草和矮牽牛突變株。與對照相比,轉(zhuǎn)基因植株株型矮小,開花轉(zhuǎn)換時葉數(shù)顯著減少,分枝數(shù)增多,且每一個分枝都能發(fā)育轉(zhuǎn)變成花序枝而開花結(jié)實。另外,轉(zhuǎn)基因植株莖細,質(zhì)感硬,石蠟切片初步顯示其木質(zhì)化程度比對照高。
　　 2.以轉(zhuǎn)NT

3、基因獲得的早花煙草的葉片為外植體,確定了其作為遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的二次轉(zhuǎn)化選擇壓力。結(jié)果表明,30 mg/L的潮霉素即可導致早花煙草葉片失去分化能力,還可導致試管苗失去分化不定根的能力。300 mg/L的頭孢霉素做為抑菌劑,對不定芽和不定根的分化能力均影響不大。
　　 3.以轉(zhuǎn)NT基因獲得的含nptⅡ選擇標記基因的早花煙草葉片為外植體,摸索了其根癌農(nóng)桿菌介導的二次遺傳轉(zhuǎn)化體系。通過導入含hpt選擇標記基因的GUS報告基因,經(jīng)檢測得