氯霉素核酸適體的篩選及基于核酸適體生物傳感器的建立.pdf

1、氯霉素(chloramphenicol，CAP)是一類有效的廣譜類抗生素，能有效地抑制革蘭氏陰性和陽性細(xì)菌，但據(jù)最新的醫(yī)學(xué)研究成果報(bào)道表明氯霉素對(duì)人體存在潛在如白血病類的致命性危害。所以，許多國家包括美國、加拿大和中國已經(jīng)禁止在動(dòng)物產(chǎn)品中使用氯霉素，歐盟(European Union，EU)也建立了氯霉素殘留的最低檢測(cè)限(minimum required performancelimit，MRPL)為0.3×10-6 g·kg-1。因此

2、，建立快速高效的氯霉素檢測(cè)方法是目前一項(xiàng)迫切的任務(wù)。
　　核酸適體(又稱適配體，aptamer)是通過指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)技術(shù)篩選得到的能夠與靶分子特異性結(jié)合的一小段ssDNA或RNA。適體具有靶分子廣泛、親和力強(qiáng)、易修飾等優(yōu)點(diǎn)，在分析化學(xué)、食品安全、臨床診斷與治療等方面應(yīng)用廣泛。
　　本文以

3、氯霉堿為靶分子，通過SELEX技術(shù)篩選出氯霉素特異核酸適體，然后建立了一種基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的核酸適體生物傳感器，并將其用于檢測(cè)牛奶樣品中氯霉素含量。
　　1、通過將氯霉素堿(CAP-base)與羧基磁珠偶聯(lián)，以乙醇胺為反篩物，利用磁珠-指數(shù)擴(kuò)增配體的系統(tǒng)(Mag-SELEX)技術(shù)篩選氯霉素核酸適體。通過10輪篩選，得到了能5條可與CAP結(jié)合的寡核苷酸適體群(No.1、No.4、No.5、No.6和No.10)。這五條核酸

4、適體具有較好的親和能力，但彼此之間的同源性較低;其解離常數(shù)(Dissociation constant，Kd)的范圍0.03224～0.3244μM。挑選Kd值最低的兩條核酸適體(No.4和No.5)進(jìn)行特異性研究，結(jié)果表明No.5的特異性優(yōu)于No.4。結(jié)合親和力與特異性分析，No.5是CAP的特異性核酸適體。因此，No.5將作為識(shí)別元件應(yīng)用于后續(xù)的核酸適體生物傳感器的建立。
　　2、建立了基于實(shí)時(shí)熒光PCR的核酸適體生物傳感器。