蛹蟲(chóng)草子實(shí)體分化及生長(zhǎng)特性的研究.pdf

1、蛹蟲(chóng)草屬于子囊菌綱中的蟲(chóng)草屬真菌，具有和冬蟲(chóng)夏草相似的藥理作用。由于蛹蟲(chóng)草菌生長(zhǎng)條件不很嚴(yán)格，可以在多種人工培養(yǎng)基上發(fā)育出子實(shí)體，所以，對(duì)蛹蟲(chóng)草的開(kāi)發(fā)研究成為近年來(lái)的熱點(diǎn)問(wèn)題。大多數(shù)研究主要集中在栽培技術(shù)和生物活性成分方面，對(duì)于蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)、子實(shí)體分化發(fā)育的特征特性及其規(guī)律，目前還不十分清楚。在實(shí)際栽培時(shí)不能有效地控制其分化發(fā)育條件，菌種質(zhì)量以及菌絲生長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)很大差異，導(dǎo)致子實(shí)體分化發(fā)育不整齊，甚至不能出草，造成嚴(yán)重?fù)p失。本文以實(shí)驗(yàn)室

2、保藏的九株蛹蟲(chóng)草菌為研究對(duì)象，首先通過(guò)拮抗試驗(yàn)、酯酶同工酶分析以及培養(yǎng)觀察篩選出優(yōu)良菌株；再采取單因素及正交試驗(yàn)優(yōu)化蛹蟲(chóng)草的液體及固體培養(yǎng)條件，測(cè)定不同生長(zhǎng)階段培養(yǎng)基質(zhì)中主要酶活性變化；最后對(duì)蛹蟲(chóng)草子實(shí)體分化及生長(zhǎng)過(guò)程的生理特性及形態(tài)變化進(jìn)行了總結(jié)。主要結(jié)果如下：
　　?對(duì)九株蛹蟲(chóng)草菌進(jìn)行拮抗試驗(yàn)，結(jié)果顯示C1、C2、C9之間無(wú)拮抗現(xiàn)象，菌絲生長(zhǎng)融為一體呈灰白色稀疏絨毛狀；C3、C4、C5、C6、C7之間無(wú)拮抗現(xiàn)象，菌絲呈白色圓環(huán)

3、匍匐狀；C8與其他各菌都有拮抗現(xiàn)象，菌絲呈乳白色絨毛狀。酯酶同工酶分析結(jié)果顯示，六株蛹蟲(chóng)草菌在酶譜中各檢測(cè)到一條酶帶，其中C4、C3、C7、C8、C5、C2遷移率分別為0.41，0.45，0.47，0，0.46，0.36；說(shuō)明C3，C4，C5，C7有親緣關(guān)系，C2與C8跟它們沒(méi)有親緣性。各菌株進(jìn)行子實(shí)體形態(tài)觀察試驗(yàn)得出，C6的子實(shí)體生長(zhǎng)旺盛，呈橙黃色，產(chǎn)量達(dá)8.7g/瓶；C2、C8只是菌絲生長(zhǎng)而且菌絲色澤和長(zhǎng)勢(shì)都較差，見(jiàn)光后不轉(zhuǎn)色，不長(zhǎng)

4、子實(shí)體。在此條件下菌絲體干重分別達(dá)3.7g/L，3.9g/L。子實(shí)體形態(tài)觀察與拮抗試驗(yàn)，酯酶同工酶分析結(jié)果基本一致。綜合得出九種蛹蟲(chóng)草菌分為三類，分別為C1、C2、C9為一類，C3、C4、C5、C6、C7為一類，C8為一類。
　　?以 C6為出發(fā)菌株，篩選出適合菌絲生長(zhǎng)的斜面培養(yǎng)基碳氮源為葡萄糖和蛋白胨，液體培養(yǎng)基碳氮源為蔗糖和蛋白胨，各種因素對(duì)菌絲干重影響的顯著性依次為氮源>菌種種類>碳源；溫度>初始pH值>搖床轉(zhuǎn)速。比較不同的

5、液體培養(yǎng)基配方，得到適合菌絲生長(zhǎng)的的液體培養(yǎng)基配方為1L水中含馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨3g，磷酸二氫鉀0.5g，硫酸鎂0.2g， VB110mg。
　　?對(duì)子實(shí)體培養(yǎng)的培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，篩選出有利于子實(shí)體生長(zhǎng)的最優(yōu)培養(yǎng)基組成為培養(yǎng)料小麥40g，營(yíng)養(yǎng)液60mL，其中營(yíng)養(yǎng)液包括：1L水中添加蔗糖20g，蛋白胨5g，磷酸二氫鉀0.5g，硫酸鎂0.2g，VB110mg，蠶蛹粉0.5g。適宜的生長(zhǎng)條件為，溫度22℃，空氣濕度80％

6、，光照強(qiáng)度200lux，在此條件下蛹蟲(chóng)草菌絲轉(zhuǎn)色快，子實(shí)體生長(zhǎng)健壯，顏色鮮艷橙黃，生物學(xué)產(chǎn)量高。
　　?測(cè)定蛹蟲(chóng)草不同生長(zhǎng)階段中培養(yǎng)基的主要酶活及總糖、還原糖、游離氨基酸含量的變化，結(jié)果表明，羧甲基纖維素酶、淀粉酶、酸性蛋白酶在菌絲生長(zhǎng)時(shí)期酶活性較低分別為1.14U、2.6、5.6U；在子實(shí)體生長(zhǎng)期酶活性最高，分別為10.71U、8.4U、44.8U。隨著子實(shí)體生長(zhǎng)，基質(zhì)中總糖、還原糖及游離氨基酸含量處于先升高后又下降的趨勢(shì)。在菌

7、絲生長(zhǎng)期分別為
　　0.347 mg/g、0.131 mg/g、3.2 mg/g，在子實(shí)體生長(zhǎng)期分別為0.671mg/g、0.427mg/g、5.6mg/g。
　　?蛹蟲(chóng)草從接種到子實(shí)體成熟經(jīng)過(guò)菌種萌發(fā)期、菌絲擴(kuò)展期、菌絲轉(zhuǎn)色期、原基分化期、子座形成期、子實(shí)體分化期、子囊和子囊孢子發(fā)育期、子實(shí)體成熟期這幾個(gè)時(shí)期。從營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)再進(jìn)入生殖生長(zhǎng)直至成熟，整個(gè)過(guò)程大約需要50~60天。菌種萌發(fā)一般需要一周左右，菌絲呈白色絨毛狀。顯微觀