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文檔簡介
1、黃原膠是由野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)經(jīng)過發(fā)酵而產(chǎn)生的一種胞外多糖,由于它特殊的理化功能,被廣泛應用在各個行業(yè)。黃原膠的生物合成是一個既細致又復雜的過程,需要各種酶及蛋白因子的參與,如乙?;?、尿苷二磷酸葡萄糖脫氫酶、縮酮丙酮酸轉移酶、五種特定的轉移酶和多聚酶。乙?;甘屈S原膠生產(chǎn)過程中一種非常重要的酶,它會影響黃原膠中乙?;暮?,而黃原膠的乙酰基含量與黃原膠的穩(wěn)定性及部分理化特性正相關,因此,本實驗
2、選取的研究對象為野油菜黃單胞菌的乙酰化酶基因。
本研究以野油菜黃單胞菌CICC10258作為試驗菌株,提取基因組DNA,根據(jù)基因序列設計特異性的引物,經(jīng)PCR擴增出乙?;富蚱?,與pMD19-T載體連接獲得重組質粒并成功克隆該基因。EcoRI酶切重組質粒獲得乙?;富虻腅coRI酶切片段,與EcoRI酶切回收的pK18mobSacB自殺質粒相連,構建重組自殺性質粒載體。經(jīng)鑒定,將重組自殺性質粒載體轉化野油菜黃單胞菌CIC
3、C10258的感受態(tài)細胞,成功獲得了乙?;富蛲蛔凅w。以野油菜黃單胞菌CICC10258作為對照,分析和檢測突變體的遺傳特性。結果表明,本實驗敲除了乙?;富虿@得突變體;突變體在營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中的生長受到抑制,突變體的黃原膠產(chǎn)量減少,突變體的三種胞外酶活性也受到抑制。經(jīng)與野油菜黃單胞菌CICC10258作為對照分析,證明乙?;富蚺c黃原膠的合成、三種胞外酶活性有關。該研究不僅為構建基因工程菌奠定了基礎,而且為野油菜黃單胞菌生產(chǎn)黃
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