豬源腦心肌炎病毒GXLC株致病性研究.pdf

1、腦心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)可以引起以仔豬急性腦炎、心肌炎及母豬繁殖障礙為特征的傳染性疾病。EMCV可以感染小鼠,導致心肌炎、腦炎、糖尿病等。本研究通過將豬源EMCV GXLC株感染小鼠和斷乳仔豬,來分析該病毒的致病性。
　　 根據發(fā)表在GenBank EMCV保守序列3D基因、小鼠和豬促炎細胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6、iNOS及管家基因β-actin,分別設計特異性

2、引物和探針,構建含有各自目的基因序列的重組質粒作為陽性標準品,建立相應的TaqMan real-time PCR檢測方法。用標準品所構建的標準曲線相關系數(R2)達到0.998以上;可以檢測到標準品下限濃度為1×101copies/μL;與FMDV、CSFV、PRRSV、PRV、PCV2和BHK-21細胞所獲得的DNA或cDNA為模板無交叉反應。檢測促炎細胞因子和管家基因時,只有每種因子的質粒標準品和反轉錄獲得的cDNA呈現陽性反應;組

3、內與組間試驗的變異系數均在2％以下。上述試驗結果證明,我們建立的TaqMan real-time PCR方法靈敏度高,特異性強,重復性好,可用于EMCV、小鼠及豬的細胞因子的檢測和定量分析。
　　 為研究豬源EMCV GXLC株對小鼠和仔豬的致病性,將其接種4周齡健康BALB/c小鼠和斷乳仔豬。觀察臨床癥狀,觀察大體病理變化及組織病理變化,檢測心、腦、脾組織病毒含量,檢測心、腦、脾組織中細胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6、

4、iNOS mRNA水平,并測定小鼠心臟/體重比值和血清中IL-1β、TNF-α蛋白含量,同時檢測豬血清抗體滴度。結果表明:(1)感染小鼠表現出明顯的神經癥狀,多數小鼠在出現癥狀后24 h內死亡;仔豬感染后,體溫升高,表現出明顯精神萎靡等癥狀。(2)剖檢小鼠發(fā)現心臟有明顯的白色壞死灶,腦出血;仔豬發(fā)現心臟膨大、心肌變軟,腦充血,淋巴結腫大、充血。(3)感染小鼠的心重/體重比值顯著升高,血清中IL-1β、TNF-α蛋白含量升高;豬血清中可檢

5、測到高滴度的抗EMCV抗體。(4)感染小鼠和仔豬腦、心、脾、血清中檢測到大量病毒,并且其含量與臨床癥狀、病理損害等密切相關。(5)小鼠和仔豬組織病理學觀察發(fā)現,腦組織神經細胞變性、壞死,大腦皮層微血管有出血和炎性細胞浸潤,心臟組織大面積心肌細胞壞死、組織降解、萎縮和彌漫性炎癥;組織病理變化的評分值顯著升高。(6)感染小鼠和仔豬的心、腦、脾組織中IL-1β、TNF-α、IL-6、iNOS mRNA表達水平顯著上調,而且細胞因子表達的高峰期