鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥特性及β-內(nèi)酰胺酶基因研究.pdf

1、目的:
　　 1．了解溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌的分布情況及耐藥特性，為臨床抗菌藥物選擇提供依據(jù)。
　　 2．研究臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)、頭孢菌素酶(AmpC)及部分碳青霉烯酶基因的產(chǎn)生情況和基因分布特征，分析不同基因型的耐藥特性及其與β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物耐藥的相關(guān)性。
　　 3．研究產(chǎn)ESBLs菌株的同源性，為控制耐藥性的傳播提供依據(jù)。
　　 方法:

2、>　　 1．回顧性調(diào)查臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌的臨床感染分布特點(diǎn)，VITEK-60全自動(dòng)微生物分析儀和K-B紙片擴(kuò)散法檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)亞胺培南、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢唑林、氨芐西林、環(huán)丙沙星、妥布霉素、慶大霉素、復(fù)方新諾明、哌拉西林/他唑巴坦和頭孢哌酮/舒巴坦的耐藥性并分析其變遷情況。
　　 2．PCR篩選215株鮑曼不動(dòng)桿菌中ESBLs耐藥基因(TEM，SHV，VEB，PER,GES,TLA,IBC,CTX-M-1,CTX-

3、M-2,CTX-M-8,CTX-M-9,OXAI，OXAⅡ，OXAⅢ，OXAⅣ和OXAⅤ)、AmpC耐藥基因(ADC，DHA，EBC，ACC，CIT，MOX，F(xiàn)OX，CARB)及碳青霉烯酶耐藥基因(OXA-23，NDM-1)等，陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序以確定基因型；接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)探討ESBLs耐藥基因的轉(zhuǎn)移性；質(zhì)粒提取與PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)對(duì)ESBLs進(jìn)行基因定位。
　　 3．運(yùn)用脈沖場(chǎng)電泳(PFGE)技術(shù)分析產(chǎn)ESBLs菌株的同源性情況

4、。
　　 結(jié)果:
　　 1．本研究中215株鮑曼不動(dòng)桿菌主要來(lái)源于痰液標(biāo)本，占93.0％(200/215)其次為引流液1.9％(4/215)，血液1.4％(3/215)，傷口1.4％(3/215)等；其中67.9％(146/215)來(lái)自于監(jiān)護(hù)病房患者，13.5(29/215)來(lái)自于呼吸內(nèi)科患者，其他病房患者占18.6％。
　　 2．臨床常用藥物中，敏感性最好的為頭孢哌酮/舒巴坦(敏感率為54.1％)其次為亞胺培南

5、(敏感率為46.4％)，耐藥率最高的為頭孢唑林(不敏感率為99.9％)和氨芐西林(不敏感率為98.6％)，其次為頭孢曲松(不敏感率為94.4％)；慶大霉素、妥布霉素、環(huán)丙沙星、復(fù)方新諾明均處于較高耐藥水平(不敏感率均在60％以上)；其中耐藥性具明顯上升趨勢(shì)的有頭孢哌酮/舒巴坦、亞胺培南和哌拉西林/他唑巴坦，與近年來(lái)碳青霉烯類(lèi)抗生素和酶抑制劑類(lèi)抗生素的廣泛應(yīng)用有關(guān)。215株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)所有β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物包括頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢唑林

6、和氨芐西林的不敏感率均處于80％以上的高水平，耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重。
　　 3.215株鮑曼不動(dòng)桿菌中，PCR方法檢測(cè)出57株ESBLs陽(yáng)性，陽(yáng)性率為26.5％，包括PER40株(18.6％)，TEM16株(7.4％)，SHV4株(1.9％)，CTX-M-14株(1.9％)和OXAⅡ3株(1.4％)，其中8株同時(shí)攜帶PER，TEM基因，1株同時(shí)攜帶CTX-M-1和OXAⅡ基因；經(jīng)BLAST比對(duì)分析，基因型包括PER-1，TEM-1，SH

7、V-1，CTX-M-15，CTX-M-22和OXA-21;未檢測(cè)到VEB、GES、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、TLA、IBC、OXA-10、OXAI、OXAⅢ、OXAIV、OXAV等基因；104株檢測(cè)出AmpC基因，陽(yáng)性率為48.4％(104/215)，其中ADC陽(yáng)性82株，占38.1％，DHA、EBC、ACC、CIT基因陽(yáng)性株分別為35株(16.3％)，8株(3.7％)，3株(1.4％)和1株(0.5％)，同時(shí)攜帶

8、ADC、DHA基因21株，同時(shí)攜帶ADC、DHA和EBC基因3株，同時(shí)攜帶EBC、ADC基因2株，未檢測(cè)到MOX、FOX、CARB基因，隨機(jī)選取一株ADC陽(yáng)性基因進(jìn)行測(cè)序，經(jīng)BLAST比對(duì)，基因型為ADC-25；檢出OXA-23陽(yáng)性107株，占49.8％；另外，本研究發(fā)現(xiàn)1株攜帶NDM-1基因的鮑曼不動(dòng)桿菌。
　　 4．ESBLs陽(yáng)性菌株接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)均未見(jiàn)接合子生長(zhǎng)，接合試驗(yàn)陰性。
　　 5．對(duì)部分ESBLs陽(yáng)性菌株提取

9、質(zhì)粒、PCR擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)所有基因均位于質(zhì)粒上。
　　 6．通過(guò)PFGE分析，15株P(guān)ER型ESBLs陽(yáng)性的鮑曼不動(dòng)桿菌中，共分成A、B、C3個(gè)克隆。其中有13株屬于A克隆，主要分布在監(jiān)護(hù)病房，其他病區(qū)包括腦外、神外、燒傷/創(chuàng)傷、觀察室和呼吸內(nèi)科，提示同一克隆株在相同病區(qū)和不同病區(qū)之間均存在不同程度的克隆播散，說(shuō)明本院PER型ESBLs流行株克隆播散現(xiàn)象嚴(yán)重。
　　 結(jié)論:
　　 1．所測(cè)215株鮑曼不動(dòng)桿菌僅對(duì)少數(shù)

10、抗菌藥物敏感性稍高，對(duì)大多數(shù)抗菌藥物尤其β-內(nèi)酰胺類(lèi)呈現(xiàn)較高的耐藥性，且耐藥性有明顯上升趨勢(shì)，耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重。
　　 2.215株鮑曼不動(dòng)桿菌ESBLs基因型以PER為主，通過(guò)PFGE可知，其流行的主要形式為克隆播散，TEM、CTX-M-1、SHV、OXAⅡ等ESBLs基因都有檢出；AmpC基因型以ADC為主，DHA、EBC、ACC、CIT也都有檢出。
　　 3．鮑曼不動(dòng)桿菌ESBLs陽(yáng)性基因大多數(shù)位于質(zhì)粒上。