日本血吸蟲(chóng)促凋亡基因SjBAD的初步研究.pdf

1、血吸蟲(chóng)病(Schistosomiasis)至今仍然是一個(gè)全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題，數(shù)以百萬(wàn)計(jì)的人受其威脅。主要是由血吸蟲(chóng)(Schistosome)尾蚴感染而引起的一種寄生蟲(chóng)病。血吸蟲(chóng)病的防治方法仍然以吡喹酮的給藥治療為主，但是目前已有報(bào)道長(zhǎng)期使用吡喹酮可以誘導(dǎo)產(chǎn)生抗藥性。因此目前發(fā)展高效、安全的疫苗是持續(xù)控制血吸蟲(chóng)病的一種理想的研究方向。
　　細(xì)胞凋亡是由多基因嚴(yán)格控制的細(xì)胞程序性死亡。細(xì)胞凋亡對(duì)維持生物體正常的生長(zhǎng)發(fā)育以及內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定

2、具有重要作用。本課題組前期的研究表明，不同適宜性宿主來(lái)源的日本血吸蟲(chóng)童蟲(chóng)在形態(tài)、發(fā)育以及蟲(chóng)體細(xì)胞凋亡現(xiàn)象方面都存在顯著的差別，推測(cè)細(xì)胞凋亡可以影響日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)體的生長(zhǎng)發(fā)育。
　　BAD是Bcl-2相關(guān)的死亡啟動(dòng)子(bcl-2 associated death promoter)，屬于Bcl-2家族的促凋亡基因，僅含有BH3。本文SjBAD的基因序列來(lái)自歐洲分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)庫(kù)（EMBL，http://www.ebi.ac.uk/

3、），基因編號(hào)為SjD AY814710.1，設(shè)計(jì)特異引物，選用42d蟲(chóng)體cDNA為模板。PCR擴(kuò)增，克隆了日本血吸蟲(chóng)SjBAD ORF編碼的部分基因，長(zhǎng)度為594bp，編碼197個(gè)氨基酸。選用pET-28a(+)，構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)-SjBAD，并將其轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21中，成功誘導(dǎo)了重組蛋白pET-28a(+)-SjBAD，分子質(zhì)量約為27kDa。實(shí)時(shí)定量PCR分析表明SjBAD基因在日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)體的各個(gè)發(fā)育階段

4、均有轉(zhuǎn)錄，在14d蟲(chóng)體中表達(dá)量最高，隨后隨著蟲(chóng)體的生長(zhǎng)，相對(duì)表達(dá)量逐漸降低，在42d雄蟲(chóng)的表達(dá)量高于雌蟲(chóng)。Western blotting分析表明重組SjBAD具有較好的抗原性和免疫原性。間接ELISA分析表明重組蛋白免疫小鼠產(chǎn)生了高水平的特異性IgG抗體。動(dòng)物免疫試驗(yàn)表明，同PBS對(duì)照組相比較，重組蛋白SjBAD在BALB/c小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)了27.50％和33.57％的減蟲(chóng)率，及39.80％和42.06％的肝臟蟲(chóng)卵減少率，差異都非常顯著