不同免疫方式對雛雞免疫器官發(fā)育、細胞增殖及凋亡相關基因表達的影響.pdf

1、為研究不同免疫方式對雛雞的應激以及對雛雞免疫器官發(fā)育、細胞增殖、分化及凋亡相關基因表達的影響,揭示免疫應激對免疫器官發(fā)育抑制的機理,進行如下試驗。
　　 試驗設計
　　 選取1日齡健康固始雞公雛240只,隨機分為A、B、C、D四個處理,每個處理4個重復,每個重復15只雞。其中A組為對照組,抓捕后放回原籠；B組采用ND-IB弱毒苗進行滴鼻點眼免疫；C組和D組均采用ND-IB弱毒苗和滅活苗進行滴鼻點眼和皮下注射免疫,且D組從

2、7日齡起在日糧中添加維生素E(100 IU/kg)。所有雞只于10日齡早上8:00進行免疫。
　　 試驗一不同免疫方式對雛雞應激敏感激素水平的影響
　　 于免疫后的1d、3d、5d和7d從每個處理每重復取3只雞,稱活體重,心臟采血,分離血清,ELISA試劑盒檢測血清應激敏感激素促腎上腺皮質激素(ACTH)和皮質酮(CORT)的濃度,結果表明:滴鼻點眼和皮下注射免疫均對雛雞造成一定應激；應激從免疫后第3d開始得到緩解；日糧

3、添加VE(100IU/kg)能夠有效緩解應激。
　　 試驗二不同免疫方式對雛雞體重與免疫器官發(fā)育的影響
　　 于免疫后的1d、3d、5d和7d從每個處理每重復取3只雞,稱活體重,分離胸腺、脾臟和法氏囊并稱重,計算免疫器官指數(shù)。結果表明:不同免疫方式對雛雞的體重均無顯著影響；皮下注射免疫導致雛雞胸腺重量顯著增加,添加VE(100IU/kg)后雛雞的胸腺重略有降低；不同免疫方式對雛雞脾臟和法氏囊發(fā)育均無顯著影響。
　　

4、 試驗三不同免疫方式對雛雞免疫器官細胞增殖的影響
　　 丁免疫后的1d、3d、5d和7d從每個處理每重復取1只雞,分離胸腺、脾臟和法氏囊,采用流式細胞術檢測免疫器官細胞周期百分比,包括:分裂間期1(G1期)、DNA合成期(S期)和有絲分裂期(M期),計算細胞增殖指數(shù)。結果表明:皮下注射免疫導致雛雞胸腺G1細胞比例在免疫后第3-5d時升高,抑制了胸腺細胞的增殖；添加VE(100IU/kg)后胸腺G1細胞比例降低,更多細胞進入DN

5、A合成期:各組的脾臟細胞增殖指數(shù)在免疫后1-5d呈下降趨勢。
　　 試驗四不同免疫方式對免疫器官細胞凋亡相關基因表達量的影響
　　 于免疫后的1d、3d、5d和7d從每個處理每重復取1只雞,分離胸腺、脾臟和法氏囊,提取總RNA,反轉錄出cDNA,用SYBR Green1做染料,以β-actin為參照基因,采用實時熒光定量PCR法檢測抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Fas和FasL的相對表達量。結果表明:皮下注射免疫導致法