熱量限制通過SIRT1保護大鼠造影劑急性腎損傷.pdf

1、造影劑急性腎損傷(contrast induced acute kidney injury，CI-AKI)是造影的重要并發(fā)癥，其發(fā)生增加了患者醫(yī)療風險。據(jù)統(tǒng)計，CI-AKI已成為醫(yī)源性急性腎功能不全的第3大病因，增加了院內(nèi)死亡率、透析率。雖然前期研究已發(fā)現(xiàn)一些化合物能夠保護CI-AKI，但循證醫(yī)學提示除水化療法具有一定預防作用外，目前尚無明確的防治CI-AKI的手段。由于目前碘造影劑的使用不可避免，因此開發(fā)防治CI-AKI的藥物具有重要

2、的臨床意義。
　　熱量限制(Calorie Restriction)是一種通過減少食物攝入總熱量，但不至引起營養(yǎng)不良的一種飲食控制方法。自20世紀30年代以來，熱量限制在延緩衰老和減輕衰老相關器官損傷中的作用不斷被認識提高，其延長壽命的作用在多種生物中得到了廣泛證實。隨著近年來研究的深入，熱量限制的作用已擴展到多種器官的保護和疾病模型。研究發(fā)現(xiàn)熱量限制對多種腎臟疾病模型如衰老相關腎損傷、糖尿病腎病、腎臟缺血再灌注損傷、順鉑誘導腎損

3、傷等具有保護作用。
　　熱量限制多種腎臟保護作用與沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent information regulator1，SIRT1)有關。SIRT1是一種去乙?；?，通過去乙?；喾N受體蛋白從而調(diào)節(jié)相關基因沉默，對細胞中多種生物學功能如凋亡、自噬、代謝等發(fā)揮調(diào)控作用。由于造影劑隨循環(huán)血入腎后造成髓質(zhì)缺血缺氧、氧化應激對腎小管上皮細胞的損傷是造影劑急性腎損傷發(fā)病機制的中心環(huán)節(jié)，而前期研究發(fā)現(xiàn)熱量限制能夠在腎臟發(fā)揮抗氧化應激

4、、抗凋亡作用，因此推測熱量限制能夠保護CI-AKI，并且這種保護作用很可能與上調(diào)腎臟SIRT1表達有關，因此設計了本課題。本研究以CI-AKI大鼠為研究對象，觀察熱量限制對大鼠CI-AKI的作用，并深入探討其機制。
　　目的：
　　觀察熱量限制對大鼠CI-AKI的作用并探討其機制。
　　方法：
　　清潔級SD大鼠，10到12周齡，雌雄各半，體質(zhì)量230±15g，分做兩組，一組自由進食（AL組），一組大鼠給予正常日

5、進食量60％喂養(yǎng)（CR組），兩組均自由進水，飼養(yǎng)4周。4周后兩組大鼠根據(jù)給藥不同再分為7組：對照組（Vehicle組）、單純熱量限制組（CR組）、CI-AKI模型組（CM組）、熱量限制+CI-AKI模型組（CR+CM組）、抑制劑+熱量限制+CI-AKI模型組(EX527+CR+CM組)、白藜蘆醇+CI-AKI模型組（RES+CM組）、抑制劑+白藜蘆醇+CI-AKI模型組（EX527+RES+CM組），每組5只。分離頸外靜脈后將PE-10

6、塑料管插入。通過置管注射吲哚美辛(10mg/kg)。15min后注入L-NAME，劑量10mg/kg。再次間隔15min注入碘普羅胺，劑量1.8g(I)/kg，以此制作CI-AKI大鼠模型。EX527（10mg/kg）、白藜蘆醇(25mg/kg)間隔30min，在造模前經(jīng)腹腔注射給予。藥物注射完成后拔除大鼠頸外靜脈置管，縫合皮膚，待大鼠蘇醒后放回動物房代謝籠飼養(yǎng)24h，允許大鼠自由進食水，收集尿液。24h后重新麻醉大鼠，取血和腎臟。測定

7、測定Scr、BUN、Ucr，計算CCr。腎臟進行HE染色，觀察病理改變，對腎小管損傷情況進行評定。提取腎臟組織蛋白，檢測MDA、SOD、MPO、IL-1β水平，TUNEL染色觀察腎組織凋亡情況并計數(shù)凋亡細胞數(shù)目，免疫熒光染色觀察腎臟組織SIRT1蛋白表達變化。Western blot檢測各組大鼠腎組織Cleaved Caspase-3、Total Caspase-3、SIRT1蛋白表達變化。
　　結(jié)果：
　　1.熱量限制預處

8、理能夠改善CI-AKI大鼠腎功能，降低Scr、BUN水平，增加CCr，減輕腎臟病理損傷。
　　2.熱量限制預處理能夠減少CI-AKI大鼠腎臟細胞凋亡，降低氧化應激和炎癥反應水平。
　　3.CI-AKI大鼠腎臟SIRT1蛋白表達下降，而熱量限制預處理能夠改善這種下降趨勢。
　　4.SIRT1特異性抑制劑EX527能夠部分阻斷熱量限制對CI-AKI的保護作用，而白藜蘆醇能夠模擬這種保護作用。
　　結(jié)論：
　　熱