Flt3L參與小鼠實驗性腸炎中的作用及其機制.pdf

1、背景：
　　Flt3L是樹突狀細胞（DCs）分化關鍵的細胞生長因子，在體內Flt3L及其受體Flt3能調節(jié)骨髓造血祖胞沿著DC發(fā)育途徑分化成多種不同類型的DCs，尤其是漿細胞樣樹突狀細胞（pDCs）。pDCs作為抗原提呈細胞中重要的一員，在調節(jié)固有免疫和適應性免疫反應中發(fā)揮著十分重要的作用。腸道免疫系統功能的紊亂在炎癥性腸病發(fā)病機理中扮演著重要的角色。DCs作為適應性免疫反應的啟動者，腸道組織中也分布有pDCs，如腸系膜淋巴結、腸

2、道固有層等。然而，pDCs在炎癥性腸病中發(fā)揮的作用和機制，目前鮮有報道。
　　目的：
　　探究Flt3L在TNBS誘導的小鼠實驗性腸炎中的作用，并闡明其作用機制。
　　方法：
　　1.GST-Flt3L融合蛋白的提取和純化：實驗室課題組前期已經構建好含PGEX-4T3-mFlt3L重組質粒的BL21大腸桿菌。在LB液體培養(yǎng)基中經IPTG誘導，大量表達融合蛋白GST-Flt3L，再用親和層析柱純化融合蛋白，并用SD

3、S-PAGE和Western Blot技術檢測融合蛋白。
　　2.小鼠實驗性腸炎模型的制備：第0天，小鼠稱重后，經直腸給予TNBS，誘導小鼠患實驗性腸炎，每天記錄小鼠體重。于第4天處死小鼠，收集組織樣本。
　　3.小鼠腹腔注射Flt3L后，再造腸炎模型：小鼠腹腔注射Flt3L10ug/天，連續(xù)10天，對照組用同樣方法給對照藥。第11天，再用TNBS誘導小鼠患腸炎。
　　4．收集實驗組和對照組樣本，檢測相關指標。

4、　　5.體外培養(yǎng)小鼠骨髓來源的pDCs，磁珠分選得到高純度的pDCs后，給予CPG-A ODN或TNBS刺激，再與CD4+ T細胞共培養(yǎng)，流式檢測CD4+T細胞分化成Treg細胞比例，Elisa檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-10含量。
　　6.檢測方法與指標：
　　（1）Western blot檢測GST-Flt3L融合蛋白；
　?。?）誘導小鼠腸炎后檢測小鼠體重、結腸長度、大體評分等指數變化；
　　（3）HE染色檢測

5、小鼠結腸組織組織病理學改變以及組織病理評分；
　?。?）流式細胞術檢測小鼠脾臟和淋巴結中pDCs的比例；
　?。?）流式細胞術檢測體外共培養(yǎng)細胞中Treg細胞的比例；
　?。?）Elisa檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-10的含量。
　　結果：
　　1.成功提取純化GST-Flt3L融合蛋白；
　　2.成功建立TNBS誘導的小鼠實驗性腸炎；
　　3.與對照組相比，Flt3L能夠顯著提高腸炎小鼠體內pDC